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RIA
1.
放射免疫分析簡介 Introductionof RadioImmunoAssay -醫事放射師公會全聯會線上課程 Camus C.Y.
Wu 吳志毅 NM&MI Dep. of C.G.M.H. Linkou 林口長庚核醫暨分子影像科 Medical radiation technologist 醫事放射師 醫 事 放 射 師 公 會 全 聯 會 繼 續 教 育 講 師
2.
放射免疫分析與一般利用抗原-抗體結 合或競爭的體外檢驗分析類似,以加入 微量放射性同位素(通常為碘-125;I- 125),再利用抗體抗原競爭的方法,使 其可以測得血中極微量( 10-9 ~10-12
mole) 的改變。
3.
1960年代,Yalow 和 Berson博士共同發表「競爭 性蛋白質結合原理」,並依 據此原理發展出放射免疫分 析技術。
4.
PROTEIN 蛋白 LIGAND 結合物 ANTIBODY 抗體 RECEPTOR 受體 SERUM
PROTEIN 血清蛋白 ANTIGEN 抗原 :RIA EIA STEROID HORMONE 激素荷爾蒙 :RRA ERA SERUM PROTEIN 血清蛋白
5.
*Ag *Ag *Ag Ab Ab + Ab *AgAb →
*AgAb *AgAb 1/2 *Ag *Ag *Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag *AgAb Ag Ab AgAb 1/3
6.
7.
50% Ag Ag Ag Ag Ag Ag + Ag*Ab → Ag Ag Ag *Ab *Ab *Ab *Ab *Ab *Ab Ag*Ab Ag*Ab
8.
Hook effect與解決方法 ①將檢體做兩種不同倍數的稀釋。 ②將全部待驗檢體每10個分成一組,每組的 每個檢體各取等量(約1/10)混合置於第11 號試管中。*即稀釋10倍 ③然後再從第11號試管中取一小部分做10倍 稀釋,置於第12號試管中。*即稀釋100倍 ④最後把11號、12號檢體連同原來10個檢體 一起檢驗。 若有任何檢體發生hook effect則12號試管所測 得的數據換算後會比11號試管的數值更高。
9.
Journal of Labelled
Compounds & Radiopharmaceuticals, 30 Mar 2018,DOI: 10.1002/jlcr.3612
10.
Radioimmuno Imaging &
Therapy 64Cu-DOT-Anti-CD4 McAb追蹤90Y-3H11抗體在大鼠腦部部腫瘤療效. 一、 甲狀腺及相關受體檢驗項目
11.
抗體與測定系統的敏感度與特異 性有密切關係。目前利用動物製 造出之抗體分為多株(polyclonal)與 單株(monoclonal)兩種。 單株抗體的優點是純度高、特異 性佳,可大量生產。但是親合力 弱,適合使用於以“標記抗體” 及過量抗體為特點的IRMA方法。
12.
標記抗原的濃度約與欲測樣品濃度 接近,這樣才能讓兩者互相競爭抗 體之結合位置。 標記抗原必需仍保有抗原性才能與 抗體結合。並且必須完全純化,這 種物質亦可當做標準液使用,兩者 最好相同。
13.
做為標準液之抗原與欲測樣品不需 要有完全相同的化學構造或生物特 性,但兩者免疫特性以及對抗體的 化學反應力必須相同。因此通常會 使用與欲測樣品分子構造完全相同 的物質當標準液。
14.
培育時間:由於各種反應物質需放 在同樣的選定溫度、緩衝液內培育 一段特定的時間,以達到反應平衡 為止。 特殊情況下,會在未達平衡時即行 分離。但是每支試管的培育時間必 須一樣。
15.
分離:在同一根試管中有標化與 未標化抗原、抗體,經過培育時 間後,必須將抗原與抗體結合物 (結合體)與未結合的抗原(游 離體)分離,才計算活度(cts)。 理想的分離方法必須不干擾結合 反應、不受血清或血漿的影響, 且經濟且迅速的將游離體與結合 體完全分離。
16.
結合達到平衡時的常數 單位為:L/mole Ka愈大,靈敏度愈高
17.
RIA的品質管制:以控制組(模擬病人檢體)監測流程得準確度與精 確度。控制組檢體濃度為已知,故我們可根據其是否符合允收範 圍來決定該批測試品質是否可接受。
18.
內部品質管制項目-檢體品質: 包括了病患準備(服藥、停藥)、檢體類別 (血清、24hrs尿液、血漿、全血、其他體液)、 採檢過程(姿勢,時間)、適當容器與抗凝劑 或保存劑(防腐劑)、檢體運送(冰浴)、檢體 處理與儲存、離心、前處理方式與檢驗中 檢體儲存溫度。
19.
內部品質管制項目-試劑品質: 可行性(操作時間、難易度、成本)、可靠性 (Precision(批次內、批次間), Accuracy, Recovery, Parallelism)、試劑的使用標示 (儲存條件、有效期限)。
20.
內部品質管制項目-儀器設備的校正: 檢驗儀器設備(counter,pipette...)的品管監 測與保養維護及記錄、輔助設備(冰箱,純 水機,溫度計)的保養與測試記錄、儀器設備 的驗收以及故障修復與驗收測試記錄。
21.
外部品質管制: 為評估不同實驗室對於同一檢體使用相同 檢查方法所獲得結果之準確度比較值。亦 可說是某一檢測方法的再現性。一般使用 SDI﹙Standard Deviation Index﹚做為參考標準。 SDI愈低表示檢查方法之準確度愈高(SDI的 理想值驅近零)。
22.
Multitray Gamma counter Detector
Number >10 Deck Capacity (Tubes) 500~1000 Counter Channels (MCA) 2000~4000 Max Tube size (Diameter) optimize Energy Range ~1000KeV Resolution I-125 <35% / I-129 <30% / Cs-137 <15% / Co-57 <17% Co-58 <8% / Cr-51 <14% Background I-125 <50 Co-57 <90 Efficiency I-125 >75% Extensive Bandwidth 15~>1,000Kev 離心機/冷凍離心機 檢體離心或保持低溫離心 分離檢體血清與待測物用。 恆溫水浴槽 保持恆定作用溫度用。 檢體冰箱/超低溫冷凍櫃 試劑儲放、檢體儲放/前置 準備與長期保存用。
23.
RIA的套裝試劑 目前市售的RIA試劑盒(RIA kit)包 含前述各種試劑(標準液、品管液)、 分離劑。使用的放射性同位素則以 I-125(59.4d, e-
capture: γ-ray 35 keV(7%)X- ray 27~31 keV(140%)為主,每組kit(100test) 的活度在數個μCi左右。 Padyab Teb Co. T3 RIA Kit
24.
微量與可調分注器(Pipettes) 微量分注器:10~100, 20~200, 100~1000µl, 搭配對應的分注尖頭(tip)。 可調式分注器:1,
5, 10, 50 ml
25.
迷你振盪器(mini shaker, mixer) 適用於少量試管中的檢體搖勻用。 振盪器(shaker) 批量檢體定速搖勻用。
26.
不同濃度之標準液試管I-125 tracer 緩衝液沖洗並倒掉廢液後吸乾 計 數
27.
RIA的輻射防護工作
28.
29.
醫 檢 師
法 【修正日期】民國105年11月30日 【公布日期】民國 89年02月03日 第 12 條 醫事檢驗師業務如下: 一、一般臨床檢驗。二、臨床生化檢驗。三、臨床血清檢驗。四、臨床免疫檢驗。 五、臨床血液檢驗。六、輸血檢驗及血庫作業。七、臨床微生物檢驗。八、臨床生理檢驗。 九、醫事檢驗業務之諮詢。十、臨床檢驗試劑之諮詢。十一、其他經中央衛生主管機關認可之醫事檢驗業務。 醫事檢驗師執行業務,應依醫師開具之檢驗單為之。但經中央衛生主管機關指定或自費至醫事檢驗所檢驗之項目,不在此限。 前項但書規定於本法公布施行之日起,試行五年,屆期重新檢討。 第 14 條醫事檢驗師檢驗,應製作檢驗結果紀錄,出具檢驗報告,並於檢驗報告上簽名或蓋章。 醫事檢驗師對於醫師所開之檢驗單,以檢驗一次為限;檢驗後,醫事檢驗師應於檢驗單上簽名或蓋章,並添註檢驗日期。 第 15 條醫事檢驗師非親自檢驗,不得出具檢驗報告,並不得作不實檢驗報告。 第 33 條未取得醫事檢驗師或醫事檢驗生資格而執行醫事檢驗業務者,處二年以下 有 期徒刑,得併科新臺幣三萬元以上十五萬元以下罰金。 但在醫事檢驗師 指導下實習之相關醫事檢驗系、組、科學生或取得畢業證書日起六個月內 之畢業生,不在此限。 犯前項之 罪因而致人於死或重傷者,應依刑法加重其刑至二分之一。
30.
醫 事 放
射 師 法 【修正日期】民國105年11月30日 【公布日期】民國 89年02月03日 第 12 條 醫事放射師業務如下: 一、放射線診斷之一般攝影。二、核子醫學體外檢查。三、放射線診斷之特殊攝影及造影。四、放射線治療。五、核子醫學 診斷之造影及體內分析檢查。六、核子醫學治療。七、磁振及非游離輻射診斷之造影。八、其他經中央衛生主管機關認 定之項目。 醫事放射師執行前項第一款、第二款業務,應依醫師開具之會檢單為之。但自費至醫事放射所檢查者,不在此限;執行前項 第三款至第八款業務,應配合醫師行之。第一項各款所稱之攝影及造影,包括其影像之獲取、處理及品質管理。 第二項但書規定於本法公布施行之日起,試行五年,屆期重新檢討。 專門職業及技術人員高等考試醫事放射師考試實習認定基準 中華民國 101 年 2 月 23 日考選部選專三字第 1010000949 號令訂定發布 中華民國 102 年 9 月 24 日考選部選專四字第 1023302149 號令修正發布 高等考試醫事放射師考試實習認定基準,自中華民國 101 年 1 月 1 日以後畢業者適用。其實習學 科、實習內涵、實習週(時)數、實習場所及實習補修規定如下: 核子醫學實習 4週(160小時) 體內分析檢查技術與品保、放射免疫分析技術與品保、核子醫學診斷造影技術(含 PET) 與品保、核子醫學治療技術與品保。 實習補修規定:國內、外學歷報考者,若各學科實習內涵不足或週 (時)數未達最低標準,均可至國內各醫學院校補修,並由該 校或實習機構出具證明。
31.
感 謝 您
的 聆 聽 Thanks for your attention ! 醫放全聯會與您攜手共度疫情 台北市10356大同區重慶北路二段35號6樓之1 電話:02-25585191 c a r t @ m a i l 2 0 0 0 . c o m . t w