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放射免疫分析簡介
Introductionof RadioImmunoAssay
-醫事放射師公會全聯會線上課程
Camus C.Y. Wu  吳志毅
NM&MI Dep. of C.G.M.H. Linkou 林口長庚核醫暨分子影像科
Medical radiation technologist  醫事放射師
醫 事 放 射 師 公 會 全 聯 會 繼 續 教 育 講 師
放射免疫分析與一般利用抗原-抗體結
合或競爭的體外檢驗分析類似,以加入
微量放射性同位素(通常為碘-125;I-
125),再利用抗體抗原競爭的方法,使
其可以測得血中極微量( 10-9 ~10-12 mole)
的改變。
1960年代,Yalow 和
Berson博士共同發表「競爭
性蛋白質結合原理」,並依
據此原理發展出放射免疫分
析技術。
PROTEIN
蛋白
LIGAND
結合物
ANTIBODY 抗體
RECEPTOR 受體
SERUM PROTEIN 血清蛋白
ANTIGEN 抗原 :RIA  EIA
STEROID HORMONE 激素荷爾蒙 :RRA  ERA
SERUM PROTEIN 血清蛋白
*Ag
*Ag
*Ag Ab
Ab
+
Ab *AgAb
→ *AgAb
*AgAb
1/2
*Ag
*Ag
*Ag
Ag
Ag
Ag
Ag
Ag
Ag
Ag
Ag
Ag
Ag
Ag
Ag
*AgAb
Ag Ab
AgAb
1/3
50%
Ag
Ag
Ag
Ag
Ag
Ag +
Ag*Ab
→
Ag
Ag
Ag
*Ab
*Ab
*Ab
*Ab
*Ab
*Ab
Ag*Ab
Ag*Ab
Hook effect與解決方法
①將檢體做兩種不同倍數的稀釋。
②將全部待驗檢體每10個分成一組,每組的
每個檢體各取等量(約1/10)混合置於第11
號試管中。*即稀釋10倍
③然後再從第11號試管中取一小部分做10倍
稀釋,置於第12號試管中。*即稀釋100倍
④最後把11號、12號檢體連同原來10個檢體
一起檢驗。
若有任何檢體發生hook effect則12號試管所測
得的數據換算後會比11號試管的數值更高。
Journal of Labelled Compounds & Radiopharmaceuticals, 30 Mar 2018,DOI: 10.1002/jlcr.3612
Radioimmuno Imaging & Therapy
64Cu-DOT-Anti-CD4 McAb追蹤90Y-3H11抗體在大鼠腦部部腫瘤療效.
一、 甲狀腺及相關受體檢驗項目
抗體與測定系統的敏感度與特異
性有密切關係。目前利用動物製
造出之抗體分為多株(polyclonal)與
單株(monoclonal)兩種。
單株抗體的優點是純度高、特異
性佳,可大量生產。但是親合力
弱,適合使用於以“標記抗體”
及過量抗體為特點的IRMA方法。
標記抗原的濃度約與欲測樣品濃度
接近,這樣才能讓兩者互相競爭抗
體之結合位置。
標記抗原必需仍保有抗原性才能與
抗體結合。並且必須完全純化,這
種物質亦可當做標準液使用,兩者
最好相同。
做為標準液之抗原與欲測樣品不需
要有完全相同的化學構造或生物特
性,但兩者免疫特性以及對抗體的
化學反應力必須相同。因此通常會
使用與欲測樣品分子構造完全相同
的物質當標準液。
培育時間:由於各種反應物質需放
在同樣的選定溫度、緩衝液內培育
一段特定的時間,以達到反應平衡
為止。
特殊情況下,會在未達平衡時即行
分離。但是每支試管的培育時間必
須一樣。
分離:在同一根試管中有標化與
未標化抗原、抗體,經過培育時
間後,必須將抗原與抗體結合物
(結合體)與未結合的抗原(游
離體)分離,才計算活度(cts)。
理想的分離方法必須不干擾結合
反應、不受血清或血漿的影響,
且經濟且迅速的將游離體與結合
體完全分離。
結合達到平衡時的常數
單位為:L/mole
Ka愈大,靈敏度愈高
RIA的品質管制:以控制組(模擬病人檢體)監測流程得準確度與精
確度。控制組檢體濃度為已知,故我們可根據其是否符合允收範
圍來決定該批測試品質是否可接受。
內部品質管制項目-檢體品質:
包括了病患準備(服藥、停藥)、檢體類別
(血清、24hrs尿液、血漿、全血、其他體液)、
採檢過程(姿勢,時間)、適當容器與抗凝劑
或保存劑(防腐劑)、檢體運送(冰浴)、檢體
處理與儲存、離心、前處理方式與檢驗中
檢體儲存溫度。
內部品質管制項目-試劑品質:
可行性(操作時間、難易度、成本)、可靠性
(Precision(批次內、批次間), Accuracy,
Recovery, Parallelism)、試劑的使用標示
(儲存條件、有效期限)。
內部品質管制項目-儀器設備的校正:
檢驗儀器設備(counter,pipette...)的品管監
測與保養維護及記錄、輔助設備(冰箱,純
水機,溫度計)的保養與測試記錄、儀器設備
的驗收以及故障修復與驗收測試記錄。
外部品質管制:
為評估不同實驗室對於同一檢體使用相同
檢查方法所獲得結果之準確度比較值。亦
可說是某一檢測方法的再現性。一般使用
SDI﹙Standard Deviation Index﹚做為參考標準。
SDI愈低表示檢查方法之準確度愈高(SDI的
理想值驅近零)。
Multitray Gamma counter
Detector Number >10 Deck Capacity (Tubes) 500~1000
Counter Channels (MCA) 2000~4000
Max Tube size (Diameter) optimize
Energy Range ~1000KeV
Resolution
I-125 <35% / I-129 <30% / Cs-137 <15% / Co-57 <17%
Co-58 <8% / Cr-51 <14%
Background I-125 <50 Co-57 <90
Efficiency I-125 >75%
Extensive Bandwidth 15~>1,000Kev
離心機/冷凍離心機
檢體離心或保持低溫離心
分離檢體血清與待測物用。
恆溫水浴槽
保持恆定作用溫度用。
檢體冰箱/超低溫冷凍櫃
試劑儲放、檢體儲放/前置
準備與長期保存用。
RIA的套裝試劑
目前市售的RIA試劑盒(RIA kit)包
含前述各種試劑(標準液、品管液)、
分離劑。使用的放射性同位素則以
I-125(59.4d, e- capture: γ-ray 35 keV(7%)X-
ray 27~31 keV(140%)為主,每組kit(100test)
的活度在數個μCi左右。
Padyab Teb Co. T3 RIA Kit
微量與可調分注器(Pipettes)
微量分注器:10~100, 20~200, 100~1000µl,
搭配對應的分注尖頭(tip)。
可調式分注器:1, 5, 10, 50 ml
迷你振盪器(mini shaker, mixer)
適用於少量試管中的檢體搖勻用。
振盪器(shaker)
批量檢體定速搖勻用。
不同濃度之標準液試管I-125 tracer
緩衝液沖洗並倒掉廢液後吸乾
計 數
RIA的輻射防護工作
醫 檢 師 法 【修正日期】民國105年11月30日 【公布日期】民國 89年02月03日
第 12 條 醫事檢驗師業務如下:
一、一般臨床檢驗。二、臨床生化檢驗。三、臨床血清檢驗。四、臨床免疫檢驗。
五、臨床血液檢驗。六、輸血檢驗及血庫作業。七、臨床微生物檢驗。八、臨床生理檢驗。
九、醫事檢驗業務之諮詢。十、臨床檢驗試劑之諮詢。十一、其他經中央衛生主管機關認可之醫事檢驗業務。
醫事檢驗師執行業務,應依醫師開具之檢驗單為之。但經中央衛生主管機關指定或自費至醫事檢驗所檢驗之項目,不在此限。
前項但書規定於本法公布施行之日起,試行五年,屆期重新檢討。
第 14 條醫事檢驗師檢驗,應製作檢驗結果紀錄,出具檢驗報告,並於檢驗報告上簽名或蓋章。
醫事檢驗師對於醫師所開之檢驗單,以檢驗一次為限;檢驗後,醫事檢驗師應於檢驗單上簽名或蓋章,並添註檢驗日期。
第 15 條醫事檢驗師非親自檢驗,不得出具檢驗報告,並不得作不實檢驗報告。
第 33 條未取得醫事檢驗師或醫事檢驗生資格而執行醫事檢驗業務者,處二年以下 有
期徒刑,得併科新臺幣三萬元以上十五萬元以下罰金。
但在醫事檢驗師 指導下實習之相關醫事檢驗系、組、科學生或取得畢業證書日起六個月內 之畢業生,不在此限。 犯前項之
罪因而致人於死或重傷者,應依刑法加重其刑至二分之一。
醫 事 放 射 師 法 【修正日期】民國105年11月30日 【公布日期】民國 89年02月03日
第 12 條 醫事放射師業務如下:
一、放射線診斷之一般攝影。二、核子醫學體外檢查。三、放射線診斷之特殊攝影及造影。四、放射線治療。五、核子醫學
診斷之造影及體內分析檢查。六、核子醫學治療。七、磁振及非游離輻射診斷之造影。八、其他經中央衛生主管機關認
定之項目。
醫事放射師執行前項第一款、第二款業務,應依醫師開具之會檢單為之。但自費至醫事放射所檢查者,不在此限;執行前項
第三款至第八款業務,應配合醫師行之。第一項各款所稱之攝影及造影,包括其影像之獲取、處理及品質管理。
第二項但書規定於本法公布施行之日起,試行五年,屆期重新檢討。
專門職業及技術人員高等考試醫事放射師考試實習認定基準
中華民國 101 年 2 月 23 日考選部選專三字第 1010000949 號令訂定發布
中華民國 102 年 9 月 24 日考選部選專四字第 1023302149 號令修正發布
高等考試醫事放射師考試實習認定基準,自中華民國 101 年 1 月 1 日以後畢業者適用。其實習學
科、實習內涵、實習週(時)數、實習場所及實習補修規定如下:
核子醫學實習 4週(160小時)
體內分析檢查技術與品保、放射免疫分析技術與品保、核子醫學診斷造影技術(含 PET)
與品保、核子醫學治療技術與品保。
實習補修規定:國內、外學歷報考者,若各學科實習內涵不足或週
(時)數未達最低標準,均可至國內各醫學院校補修,並由該
校或實習機構出具證明。
感 謝 您 的 聆 聽
Thanks for your attention !
醫放全聯會與您攜手共度疫情
台北市10356大同區重慶北路二段35號6樓之1
電話:02-25585191
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