medios cultivo microbiologia

REQUERIMIENTOS DE LOS
MEDIOS DE CULTIVO
Requerimientos energéticos y no energéticos
Salvo excepciones, las bacterias son cultivables en medios
artificiales de laboratorio de tal forma que el medio de cultivo le
proporciona los elementos necesarios para su crecimiento y
multiplicación. De acuerdo con esto, siempre se requerirá una
fuente de energía y una fuente no energética como son las sales,
factores de crecimiento, etc., que sin proporcionar energía son
necesarias para su desarrollo.
Los requerimientos energéticos son los nutrientes de ese medio
de cultivo, que va a ser utilizado por la bacteria para su
crecimiento. Van a ser fuentes de energía en un medio de cultivo,
al menos, una fuente de carbono y una fuente de nitrógeno, y
fuentes no energéticas pueden ser una fuente de fósforo,
determinados iones como el hierro, el potasio, el sodio, el zinc, el
magnesio, etc.

REQUERIMIENTOS ENERGETICOS
Entre los requerimientos energéticos de los medios
de cultivo tenemos:
 1. Fuente de Carbono
 2. Fuente de Nitrógeno

REQUERIMIENTOS
ENERGETICOS
1. Fuentes de carbono
Existen muchos tipos de fuentes de carbono, ya que esto está ligado al
metabolismo energético de la especie microbial; por ejemplo:
Algunas bacterias son capaces de utilizar sustancias muy sencillas como
ácido acético, alcohol, citrato sódico, etc.
En otras ocasiones, la mayor parte de los casos, la fuente de carbono
corresponde a azúcares en forma de mono o disacáridos, como glucosa,
lactosa, maltosa, etc.,
Incluso hay microorganismos que pueden utilizar azúcares más complejos
para obtener energía, como es el caso del almidón.

REQUERIMIENTOS
ENERGETICOS
1. Fuentes de carbono
Existen también bacterias capaces de utilizar el
gas carbónico CO2 hecho que es característico de
las bacterias fotosintetizantes y quimiolitótrofas.
Otros microorganismos pueden crecer a expensas
del metano, benceno e, incluso, hidrocarburos
como fuente de energía: Ejemplo: Cladosporium.
Por último, existen especies como Pseudomonas,
que pueden utilizar como fuente de energía un
gran número de componentes hidrocarbonados
diferentes.
En general, conocer el tipo de azúcar utilizado por
cada bacteria es muy útil para su identificación
bioquímica y consiguiente clasificación
taxonómica.

REQUERIMIENTOS
ENERGETICOS
2. Fuente de nitrógeno
Es una fuente bastante menos energética que la fuente de carbono pero es
necesaria para el metabolismo microbiano, produciendo también energía.
Esta fuente de nitrógeno la van a formar las proteínas, péptidos o
aminoácidos. Pueden presentarse como proteínas completas, que sería el
caso de la gelatina cuya presencia sirve para determinar la actividad
proteolítica o gelatinasa del microorganismo problema, o incluso proteínas
aún más complejas, como es el caso de los extractos de carne, sales de
amonio, etc.
Es frecuente encontrar peptonas como fuente de nitrógeno que
corresponden a péptidos o polipéptidos dependiendo de su complejidad
pero en cualquier caso son también proteínas que están parcialmente
hidrolizadas, aunque no se las deba considerar como tal.

REQUERIMIENTOS
ENERGETICOS
2. Fuente de nitrogeno
Existen muchos tipos de peptonas y son
excelentes fuentes de nitrógeno.
Entre las más frecuentes y conocidas se
encuentran los extractos de levadura que
son extractos hidrosolubles preparados a
partir de un lisado de levadura que se utiliza
en muchos medios de cultivo.
El bio-Thione, es una denominación
comercial correspondiente a una peptona
pépsica de carne empleada para la
preparación, por ejemplo, del medio líquido
Sabouraud.
Tiene una alto contenido de azufre y de ahí
que en los medios de cultivo que la
contengan se pueda utilizar para investigar
la producción de sulfuro de hidrógeno (SH2)
por parte de la bacteria problema.

REQUERIMIENTO
S ENERGETICOS
2. Fuente de nitrogeno
La caseina corresponde a una peptona
sometida al proceso de digestión ácida muy
utilizada en muchos medios de cultivo, sobre
todo, en forma de peptona tripsica de caseina;
por ejemplo: para estudiar la formación de
indol por parte de la bacteria debido al alto
contenido de triptófano que posee este tipo de
peptona.
También es utilizada para estudiar la reducción
de los nitratos e incluso para el cultivo de
algunos protozoos.
La peptona papaínica de soja, es una fuente
de nitrógeno especialmente para hongos y
ciertos gérmenes exigentes como en el caso
de las Neisserias.
Otra fuente de nitrógeno sería la utilización de
nitratos, nitrógeno orgánico, amoniaco, sales
de amonio, aminoácidos, etc.

REQUERIMIENTOS NO
ENERGETICOS
Entre los requerimientos no energéticos de los
medios de cultivo tenemos:
 1. Fuente de azufre
 2. Fuente de fósforo
 3. Iones metálicos
 4. Factores de crecimiento
 5. Factores de arranque
 6. Factores inhibidores

REQUERIMIENTOS NO
ENERGETICOS
1. Fuente de azufre
Todos los microrganismos que utilizan en su metabolismo azufre lo
hacen mayoritariamente en forma de sulfatos, a veces en forma de
tiosulfatos y en otras ocasiones lo pueden obtener a partir de algún
aminoácido, ejemplo: metionina, cisteina, tiamina, etc.
Agar SIM
Agar TSI
Agar XLD
Agar TSI o KIA SIM XLD

REQUERIMIENTOS NO
ENERGETICOS
2. Fuente de fósforo
En general, las bacterias que utilizan el fósforo lo suelen hacer en
forma de fosfatos.

REQUERIMIENTOS NO
ENERGETICOS
3. Iones metálicos
Son utilizados por las bacterias bajo la forma de
iones a concentraciones muy bajas. Por ej: el
Sodio, el Potasio, Magnesio, Hierro,etc.
También se encuentra otro tipo de iones metálicos a
Cobalto, Molibdeno.
Estos iones son esenciales para el crecimiento
microbiano y dependiendo de su concentración
pueden inhibir el crecimiento de otros, como el
caso del sodio que a concentraciones altas inhibe el
crecimiento de un tipo de microorganismo y facilita
el crecimiento de otros.
Agar Manitol Salado contienen 7.5% ClNa permite
el crecimiento de Staphylococous.
Agar Streptococus KF contiene 6.5% ClNa permite
el crecimiento del Enterococus.

REQUERIMIENTOS NO
ENERGETICOS DE LOS MEDIOS
DE CULTIVO
4. Factores de Crecimiento
No todas las bacterias son capaces de crecer sobre medios donde se
encuentran cubiertas las necesidades elementales.
Existen bacterias que aún así no crecen en tales medios o, si lo hacen, es
muy lentamente. A este tipo de bacterias les hace falta además una serie de
componentes definidos que muchas bacterias no son capaces de fabricar por
sí solas para su crecimiento.
A este tipo de componentes se denomina factores de crecimiento y van a
corresponder a algún tipo de aminoácido de bacterias muy exigentes o
incluso vitaminas, bases púricas o pirimidinicas, etc.
Agar sangre enriquecido con metionina, ácido glutámico y ácido nicotínico
para el crecimiento de Xanthomonas.

HAEMOPHYLLUS
El Agar Chocolate permite el desarrollo
de colonias húmedas, lisas y grises del
Haemophylus influenzae.
Este medio contiene hematina (factor
X) y está enriquecido con otros
cofactores, como el NAD (factor V),
que permite el desarrollo de este
microorganismo.
AGAR CHOCOLATE

BORDETELLA
Agar Sangre enriquecido con
Glicerol - papa (Bordet Gengou)
para crecimiento de Bordetella
pertusis.
Se observa colonias en “gotas de
mercurio” brillantes es fácil de
apreciar.
AGAR SANGRE

FLAVOBACTERIUM
Agar sangre enriquecido con
nitrógeno suplementario y vitaminas
del complejo B para el crecimiento
del Flavobacterium.
AGAR SANGRE

REQUERIMIENTOS NO
DE CULTIVO
5. Factores de Arranque
Son sustancias que van a permitir
a la bacteria en estudio, salir de su
fase de latencia y comenzar su
fase de crecimiento exponencial.
Son fundamentalmente fuentes de
energía ”glucosa” que es utilizado
por las bacterias.
Un factor de arranque puede ser
una fuente no energética como
algún ión que estimule el
crecimiento.

REQUERIMIENTOS NO
DE CULTIVO
6. Factores Inhibidores
Son componentes que van a impedir el crecimiento de algún tipo de
microorganismo por bloqueo de sus procesos metabólicos.
Los antibióticos son agentes inhibidores o destructores de la propia bacteria.
La azida sódica inhibe el crecimiento de los Gramnegativos.
Algunos colorantes : Eosina Azul de metileno impide el crecimiento
bacteriano de los Grampositivos.
Cristal Violeta impide el crecimiento de los Grampositivos.
Las sustancias inhibidoras son muy útiles para la identificación y
tipificación de pruebas bioquímicas de las bacterias.
Agar Mac Conkey :
Agar Eosina Azul de Metileno
Agar Salmonella Shigella
Agar Verde brillante

AGAR MAC CONKEY
TIPO DE COLONIAS
Superficie de agar Mac Conkey con desarrollo de colonias a las 24 horas.
Se observa colonia rojas fermentadoras de lactosa, el color rojo se debe a
que el microorganismo produce grandes cantidades de ácido mixtos.
Se observa colonias no fermentadoras de lactosa, son colonias pequeñas y
transparentes.

AGAR EOSINA AZUL DE METILENO
El medio EMB contiene
Eosina y azul de metileno
que son colorantes de anilina
y van a inhibir el crecimiento
de los microorganismos
Grampositivos, permitiendo
el crecimiento de todas las
Enterobacterias.
Las colonias que fermentan
la lactosa y/o sacarosa se
observan de un color
púrpura. Las que no
fermentan lactosa ni sacarosa
se observan incoloras.
La Escherichia coli se
observa de color púrpura y
con brillo metálico.

CLASIFICACION DE LOS
MEDIOS DE CULTIVO

PRINCIPALES TIPOS DE MEDIOS
DE CULTIVO
Existen muchos tipos distintos de medios de cultivo, así como
diferentes clasificaciones. De acuerdo a esto y según criterios se
podrían dividir:
1. SEGÚN SU PROPORCION EN AGUA
2. SEGÚN SU USO O UTILIZACIÓN
3. SEGÚN LA COMPOSICIÓN QUE PRESENTEN
4. SEGÚN SU PRESENTACIÓN

MEDIOS DE CULTIVO
SEGÚN SU CONSISTENCIA
1. Medios sólidos.
2. Medios líquidos.
3. Medios semisólidos

POR SU CONSISTENCIA
1. MEDIOS SOLIDOS.
Corresponden a aquellos medios donde la proporción en agar está
siempre por encima del 1.5% . Koch utilizó, en 1881, por primera
vez la gelatina para obtener un medio sólido; posteriormente un
alumno suyo, Hesse, utilizaría en su lugar agar. En la actualidad,
para la solidificación de los medios es el agar el utilizado, ya que la
gelatina presenta el inconveniente de fundir a unos 24ºC, además
existen en bacteriología numerosas bacterias gelatinasa positiva
que destruirían tal medio.
La importancia, pues, de los medios sólidos es muy grande, ya que
nos permite el aislamiento, purificación y visualización de su
crecimiento en colonias, así como su posible identificación a través
de medios específicos y diferenciales de caracteres sólidos,
elaboración de antibiogramas, etc.

POR SU CONSISTENCIA
1. MEDIOS SOLIDOS.
Agar Sangre, observar la morfología de las colonias y el tipo de
hemolisis.
Agar Mac Conkey, los diferentes tipo de colonias de acuerdo al
consumo de lactosa.
Agar Mueller Hinton, prueba de susceptibilidad a los
antimicrobianos.

AGAR SANGRE
HEMOLISIS
Los Streptococus se clasifican en
base a su propiedades hemoliticas en
agar sangre.
La hemolisis parcial de los eritrocitos
da como un resultado un color
verdoso del medio sólido que rodea
las colonias (alfa-hemolisis).
Los que producen hemolisinas que
lisan los eritrocitos, produce un
aclaramiento del medio que rodea las
colonias (beta-hemolisis).

Cultivo mixto que demuestra la
presencia de dos tipos de
microorganismos:
Un morfotipo de colonias grandes
blancas, brillantes y con bordes
irregulares pertenecientes a
bacilos gramnegativos.
El otro morfotipo presenta
colonias blancas, pequeñas,
enteras, tipicas de un
microorganismo grampositivo.
AGAR SANGRE

Cultivo mixto que demuestra la
presencia de dos tipos de
microorganismos:
Un tipo de colonias grandes,
blancas pertenecientes a
Staphyloccous.
El otro tipo de colonias
puntiforme pertenecientes a
Streptococus.
AGAR SANGRE

AGAR MUELLER HINTON
ANTIBIOGRAMA
Se basa en la difusión del
antibiótico sobre el agar, y
determinar la sensibilidad
(formación de halo alrededor
del antibiótico) y/o
resistencia (crecimiento
alrededor del antibiótico).

POR SU CONSISTENCIA
2. MEDIOS LIQUIDOS.
Corresponden a los que también se denominan caldos, no
contienen agar y su composición, además de agua suele contener
al menos una fuente de carbono, sales minerales, y, en algunas
ocasiones según las características del medio, factores de
crecimiento, vitaminas, peptonas, ciertos aminoácidos, etc. Son de
gran utilidad para la realización de recuentos bacteriológicos por
turbidimetría, especialmente útil en levaduras, para la realización de
inóculos, para obtener productos metabolitos primarios o
secundarios, creados por los propios microorganismos como, por
ejemplo, antibióticos, ácidos lácticos, etc.
Caldo MRVP, para investigar la ruta utilizada en la degradación de
glucosa
Caldo Peptona, para investigar la producción de Indol.
Caldo Lactosado, para investigar la formación de ácido y gas

La formación de indol a partir
del triptofano se indica por un
color rojo despues del agregado
del reactivo de Kovac.
El tubo del la izquierda es
negativo.
El tubo de la derecha demuestra
un halo de color rojo lo que
indica la presencia de Indol.
INDOL

POR SU CONSISTENCIA
3. MEDIOS SEMISÓLIDOS.
Son medios intermedios entre los medios líquidos y los sólidos
donde su proporción en agar suele ser inferior al 0.5% pero siempre
suelen presentar una cierta cantidad que le proporcione una
consistencia semisólida.
Son útiles para ciertas pruebas bioquímicas como por ejemplo, la
prueba de oxidación- fermentación, que permiter conocer el tipo de
metabolismo oxidativo o fermentativo de la bacteria problema.
Agar O-F Hugh Leiffson
Agar SIM, estudiar movilidad, Producción de H2S, Indol.
Agar MIO, estudiar movilidad, Producción de Indol y Ornitina.

Tubo con medio para motilidad
y producción de ácido
sulfihidrico.
Los microorganismos móviles
muestran desarrollo difuso hacia
fuera de la línea de siembra.
Los microorganismos inmóviles
crecen solamente a lo largo de
la linea de siembra por punción
exterior.
Se observa un color Negro
debido a la producción de H2S
SIM

Utilización oxidativa de la glucosa.
Dos tubos con el medio O-F.
El tubo de la derecha se encuentra
abierto a la atmósfera, mientras que el
de la izquierda se encuentra cubierto
con aceite mineral para evitar la
exposiicón con el oxígeno atmosférico.
Solo se ve ácido (amarillo) en la
porción superior del tubo abierto,
indicando que el microorganismo es
capaz de oxidar la glucosa, pero no de
fermentarla.
O-F (Hugh Leifson)

MEDIOS DE CULTIVO
SEGÚN SU PRESENTACION
1. Medios deshidratados o liofilizados.
2. Medios ya preparados:
A. Sólidos en placa petri.
B. Sólidos en tubo.
B.1. Inclinado
B.2. Semi-inclinado (pico de flauta)
C. Líquidos en tubo.
D. Semisólidos en tubo.
E. De doble fase en frasco o tubo.

POR SU PRESENTACION
1. MEDIOS DESHIDRATADOS
Son medios que se comercializan tal
cual y una vez en el laboratorio deben
ser preparados adicionando la cantidad
de agua correspondiente en
condiciones totalmente asépticas o una
vez preparados en estas condiciones lo
esterilizaríamos en el autoclave. Su
composición es muy variable y puede
ser de tipo básico o más complejo.

POR SU PRESENTACION
2. MEDIOS YA PREPARADOS
Son medios que han sido elaborados por las casas comerciales
presentando un determinado control de calidad y características
específicas adecuadas a cada tipo de cultivo. Este tipo de medios
pueden presentarse en forma de placas, en tubo, como formas
sólidas, en frascos, como medios semisólidos o líquidos, en
sistemas de doble fase, etc.

POR SU PRESENTACION
A. Medios sólidos en Placa Petri
Son medios sólidos que ocupan una
superficie lo suficientemente grande
como para poder visualizar
perfectamente las colonias
microbianas (mucho mejor que en
tubo).
Estos medios se utilizan mucho para
obtener cultivos puros partiendo de
una colonia previamente aislada.
El sistema en placa es uno de los
medios que permite mejor el
aislamiento del microorganismos
que pueden crecer en él.

POR SU PRESENTACION
B. Medios sólidos en tubo
Los medios sólidos en tubo corresponden a tubos:
B.1. Con agar inclinado
Este medio solidficado tiene por finalidad aumentar la
superficie donde se va a producir el crecimiento
microbiano una vez sembrado.
Las siembras se realizarán por estría.
Agar Citrato de Simmons
Agar Urea
Agar Manitol rojo fenol.

POR SU PRESENTACION
B.2. Con agar semi-inclinado o Pico
de flauta
Estos tipos de medios son útiles para
observar el crecimiento aerobio
microbiano si se ha sembrado por estría,
el crecimiento anaerobio microbiano si se
ha sembrado por picadura (anaerobiosis
facultativa).
Agar KIA
Agar LIA
También es útil para la conservación de
cepas, porque la desecación es menor en
medios sólidos en tubo que en las placas
petri.

POR SU PRESENTACION
C. Medios líquidos en tubo
Estos medios no permiten
visualizar colonis pero tienen
muchas aplicaciones como, por
ejemplo, pruebas bioquímicas que
permiten:
La determinación del Indol.
La reducción de nitratos a nitritos
La fermentación de la glucosa,
lactosa u otro azúcar, etc.
Pueden servir para aumentar la
concentración del microorganismo
inoculado, es decir, realizar un
inóculo, y otras aplicaciones.
Estos medios no contienen en

POR SU PRESENTACION
D. Medios semisólidos en tubo
Se siembran por picadura y corresponden a un término medio entre
los líquidos y los sólidos. Se utilizan en ciertas pruebas bioquímicas
como:
La prueba de la movilidad
La prueba de oxidación-fermentación o de Hugh-Leiffson.

POR SU PRESENTACION
E. Medios de doble fase en frasco
Son frascos constituidos por una fase sólida y otra
líquida, por ejemplo, para la determinación rápida de
microorganismos en sangre. Ambas fases crecen en
el mismo medio y pueden tener un carácter aerobio o
anaerobio. Suelen contener obturadores de caucho
manteniendo completamente aislado el medio.
Medio de Ruiz Castañeda para el aislamiento de
Brucella.
Medio para Hemocultivo

MEDIOS DE CULTIVO
SEGÚN SU USO O UTILIZACION
1. Medios para aislamiento.
A. Enriquecidos
B. Selectivos
C. Diferenciales
2. Medios para crecimiento general.
3. Medios para identificación.
4. Medios para mantenimiento de cepas.

POR SU USO O UTILIZACIÓN
1. MEDIOS PARA AISLAMIENTO
Son medios muy diversos pero con la particularidad común de
poder obtener a partir de ellos colonias aisladas. Estos, según sea
su composición, se pueden a su vez dividir en:
A. Medios enriquecidos
Son medios a los cuales, como su nombre indica, se les añade
ademas de los componentes básicos, uno o varios elementos,
como por ejemplo caseína soja, triptófano, etc., que facilitan el
crecimiento de algún tipo de microorganismo generalmente
exigentes, lo que nos permite aislar el microorganismo que
buscamos.

B. Medios selectivos
Son medios en cuya composición presentan algún componente o
componentes que van a impedir el crecimiento de algún tipo
bacteriano, estableciendo con ello una selección en el tipo de
microorganismo que sí puede crecer; por ejemplo, el medio Rothe
se caracteriza porque en su composición aparece azida sódica
confiriendo al medio propiedades selectivas ya que tal componente
va impedir el crecimiento de todas las bacterias Gramnegativas,
permitiendo el crecimiento de algunas Grampositivas como
Streptococus faecalis.
Medio Salmonella Shigella, contiene en su composición sales
biliares, citrato de sodio y el verde brillante que inhibe a la flora
Grampositiva y los hacen con el grupo coliforme.

C. Medios diferenciales
Corresponden a aquellos medios que presentan las mismas
propiedades que los medios selectivos, es decir, tienen
componentes que inhiben el crecimiento de algunas bacterias y, lo
que es más característico de este medio, presentan sustancias que
al ser utilizadas, o no, por las bacterias que van a crecer en dicho
medio, dan una información suplementaria y específica, es decir,
diferencial; por ejemplo:
El medio Levine (EMB) es te medio presenta en su composición
eosina y azul de metileno que inhibe el crecimiento de los
Grampositivos y algunas Gramnegativas, facilitando el crecimineto
de la enterobacterias, que según utilicen o no la lactosa darán lugar
a una coloración característica para cada tipo de microorganismo.
Los medios diferenciales suelen ser también selectivos y se usan
con fines de aislamiento e identificación.

2. MEDIOS PARA CRECIMIENTO EN GENERAL
Son medios ya sea en forma liquida o sólida que sirven para el
cultivo de la mayor parte de las bacterias. Su composición va a
corresponder a una fuente de carbono, una fuente de nitrógeno,
sales y agua. Dentro de los medios generales más empleados
tendríamos el caldo común, que está compuesto por extracto de
carne, peptona, glucosa, cloruro de sódico y agua.

3. MEDIOS PARA IDENTIFICACIÓN
Son medios que pueden tener las mismas características que los
diferenciales tanto, nos van a servir para identificar el crecimineto y
características de algún tipo de microorganismo.
También podría corresponder a medios generales más o menos
enriquecidos conalgún componente como, por ejemplo, peptona,
urea, glucosa, etc., hecho que nos va a servir para visualizar el tipo
de metabolismo microbiano, por ejemplo:
El caldo peptonado para saber si el microorganismo es indol +.
El medio urea para la ureasa +.
El caldo glucosado para saber la fermentación de la glucosa.
Este tipo de pruebas permite clasificar taxonomicamente el
microorganismo.

Permite investigar que ruta metabólica ha
utilizado el microorganismo para consumir la
glucosa.
Si utiliza la vía de fermentación de los ácidos el
pH resultante es menor de 4.4, y el
microorganismo será Rojo de metilo (+) el cual
se va a evidenciar por el agregado del indicador
rojo de metilo y dará un color rojo (+) y
amarillo anaranjado (-).
Los microorganismos que utilizan la vía de la
acetoina serán Voges Proskauer (+) y se
evidencian por un color rojo al cabo de los 10
minutos después de agregar el KOH y el alfa-
naftol.
MRVP (CALDO GLUCOSADO)

La formación de indol a partir
del triptofano se indica por un
color rojo después del agregado
del reactivo de Kovac.
El tubo del la izquierda es
negativo.
un halo de color rojo lo que
indica la presencia de Indol.
INDOL

Tres tubos con caldo y con
tubos de Durham.
El tubo de la izquierda muestra
formación de ácido a partir de
glucosa (amarillo) y formación
de gas..
El tubo del centro muestra
formación de ácido a partir de
glucosa (amarillo).
El tubo de la derecha es
negativo (rojo).
UTILIZACION DE LA GLUCOSA

AGAR UREA
un color rojo, lo que indica una
reacción positiva.
El tubo de la izquierda no
presenta viraje de color

El tubo de arriba demuestra un
color verde y ausencia de
crecimiento.
El tubo de abajo muestra un
color azul, lo que indica una
reacción positiva.
AGAR CITRATO DE SIMMONS

Muestra una serie de reacciones.
Pico de color amarillo indica
fermentación de lactosa.
Fondo de color amarillo indica
fermentación de glucosa.
Ruptura del agar y/o burbuja, indica
formación de CO2.
Presencia de un color negro indica
producción de H2S.
El pico rojo indica que no hay
fermentación de lactosa.
El Pico rojo y fondo rojo indica que no
hay fermentación de glucosa ni lactosa.
AGAR KIA (KLIGER)

4. MEDIOS PARA MANTENIMIENTO DE CEPAS.
Son medios que suelen tener los nutrientes necesarios para
mantener a las cepas vivas durante períodos de tiempo
relativamente largos manteniéndose tales medios generalmente a
temperaturas lo suficientemente bajas en cada caso como para
impedir su crecimiento. Ejemplo, Leche descremada que congelada
se utiliza a menudo para mantener cepas durante meses.

MEDIOS DE CULTIVO SEGÚN
LA COMPOSICION QUE PRESENTEN
1. Medios naturales.
2. Medios semisintéticos.
3. Medios sintéticos.
4. Medios complejos.

POR SU COMPOSICIÓN QUE
PRESENTAN
2. MEDIOS SEMISINTETICOS
Son medios donde parte de su composición
corresponde a extractos naturales como levadura,
malta, patata, sangre, leche, etc., a los que se
añaden constituyentes sintéticos o químicamente
definidos para el crecimiento bacteriano.

PRESENTAN
1. MEDIOS NATURALES
Son aquellos cuyos componentes orgánicos e inorgánicos se
encuentran en la naturaleza, se suelen preparar
artesanalmente y, en general, pueden estar constituidos por
ciertos tejidos, líquidos orgánicos, etc., por ejemplo: la leche,
que constituye un medio natural de conservación y cultivo
favorable para numerosas bacterias. Se suele utilizar en
forma de leche simple descremada, leche tornasolada y leche
con azul de metileno. Otros medios naturales son el huevo
entero, clara o la yema, o incluso la patata, que es
ampliamente utilizada en bacteriología para el aislamiento de
muchos hongos.

PRESENTAN
3. MEDIOS SINTETICOS
Corresponden a estructuras sintéticas más o menos puras y
químicamente definidas, que están o pueden estar disueltas en agua
destilada en proporciones determinadas de forma que se obtenga
una solución adecuada para permitir el crecimiento de
microorganismo que se desee.
Estos medios sintéticos son los más utilizados en bacteriología y, en
general. Su uso puede ser para aislamiento, identificación,
crecimiento, determinación, ensayo, mantenimiento, etc. Siempre
deberán contener en su composición los siguientes elementos:
Una fuente de Carbono o azúcar.
Una fuente de nitrógeno en forma inorgánica como iones NO-3, NH+4
, o
en forma orgánica, como peptona, aminoácidos, aminas, etc.
Compuestos minerales, y entre ellos, oligoelementos.
Factores de crecimiento.
Todo medio sintético puede presentar una complejidad muy variable

PRESENTAN
4. MEDIOS COMPLEJOS
Son los primeros que se utilizaron en bacteriología, aunque en la
actualidad su uso está más restringido. Sin embargo, en
parasitología y virología se utilizan habitualmente. Se preparan de
forma compleja a partir de tejidos animales y más raramente de
vegetales. Su composición no está exactamente definida como
sucede en los medios sintéticos, es decir, no es rigurosamente
constante, y sus materias primas suelen ser carne de músculo, de
hígado, de corazón, clara o yema de huevo, azúcares, peptonas,
etc.
Medio de Lowenstein Jenssen.
Infusión cerebro corazón (BHI)

1. COMPOSICION
Fosfato monopotásico 4.0 g
Sulfato de magnesio 0.4 g
Citrato de magnesio 1.0 g
Asparragina 6.0 g
Glicerol 20.0 g
Agua destilada 1000 ml
2. PREPARACION
Disolver los ingredientes y hervir durante 2 horas.
Luego añadir 50 g de almidón de papa.
Cascar 5 huevos en condiciones asépticas en un
matraz y con ayuda de perlas de vidrio.
Agregar 50 ml de verde malaquita en solución al 2%
Distribuir en condiciones asépticas en tubos con
tapa de rosca y dejar solidificar.
3. FINALIDAD
Permitir el crecimiento del Mycobacterium.
MEDIO LOWENSTEIN JENSSEN

1. COMPOSICION
Infusión cerebro de ternera 20.0 g
Infusión corazón de res 25.0 g
Peptonas 10.0 g
Fosfato disódico 2.5 g
Glucosa 2.0 g
Cloruro de sodio 5.0 g
2. FINALIDAD
Permite el crecimiento de microorganismos considerados muy dificiles
de cultivar, en él los gérmenes mantienen su virulencia , antigenicidad
y otras características serológicas.
INFUSION CEREBRO CORAZON

1. COMPOSICION
Peptona 17.0 g
Extracto de carne 3.0 g
Agar - Agar 12.5 g
2. DESCRIPCION DEL MEDIO
A. Requerimiento energético:
B. Requerimiento no energético
C. Según su proporción en agua
D. Según su uso o utilización
E. Según la composición que presenta
F. Según su presentación
AGAR NUTRITIVO

1. COMPOSICION
Extracto de levadura 3.0 g Rojo fenol 0.08 g
Peptona o polipeptona 10.0 g Verde brillante 0.0125 g
Lactosa 10.0 g Agar - Agar 20.0 g
Sacarosa 10.0 g Agua destilada 1000 ml
AGAR VERDE BRILLANTE

1. COMPOSICION
Peptona de caseina 17.0 g Rojo neutro 0.03 g
Peptona de carne 3.0 g Cristal violeta 0.001 g
Sales biliares 1.5 g Agua destilada 1000 ml
AGAR MAC CONKEY

1. COMPOSICION
Peptona de caseina 5.0 g Citrato de sodio 10.0 g
Peptona de carne 5.0 Tiosulfato de sodio 10.0 g
Bilis de buey desecada 5.0 Colato de sodio 3.0
Sacarosa 20.0 Citrato hierro (III) 1.0
Cloruro de sodio 10.0 Azul de timol 0.04
Agar-agar 14.0 Azul de Bromotimol 0.04
AGAR TCBS

AGAR TCBS
Las colonias amarillas, se
deben a la utilización del
citrato y a la formación de
ácido por la utilización de la
sacarosa del medio.
Vibrio Cholerae.
V. Algynolyticus
V. Cincinatiensis
V.fluvialis
V. Furnisii
V. metsnichnikovii
AGAR TCBS (pH del medio 8.6 +/- 0.1)
El pH alcalino inhibe notablemente a las enterobacterias.

AGAR
TCBS
Las colonias gris verdosa
semitranslúcida indica que el
microorganismos no utiliza la
sacarosa.
Vibrio parahaemolyticus
V. Mimicus.
V. Damsela
V. hollisae

1. COMPOSICION
Peptona de caseina 10.0g Eosina amarilla 0.3 g
Lactosa 5 Azul de metileno 0.065
Sacarosa 5 Agar-agar 13.5
Fosfato dipotásico 2 Agua destilada 1000 ml
AGAR EOSINA AZUL DE METILENO

Agar Eosina Azul de
Metileno (EMB) de Levine Los colorantes de Eosina y azul de
metileno inhiben a las bacterias
Grampositivas y a las Gramnegativas
exigentes. También se combinan
precipitando a pH ácido, actuando como
indicadores de producción de ácidos.
 Los fermentadores fuertes de lactosa:
Escherichia coli, producen colonias color
negro verdoso con brillo metálico. El
brillo metálico indica una fuerte
producción de ácido con una caída de
pH a 4.5 o menos.
 Los productores débiles de ácidos,
producen colonias violeta, Klebsiella,
Enterobacter, Serratia, Hafnia.
 Los no fermentadores de lactosa, forman
colonias incoloras. Salmonella,
Shigella, Proteus..

Agar Eosina Azul de
Metileno (EMB) de Levine

1. COMPOSICION
Extracto de carne 5.0 g Citrato de fierro amoniacal 1.0 g
Proteosa peptona 5 Verde brillante 0.0003
Lactosa 10 Rojo neutro 0.025
Bilis de buey 8.5 Agar-agar 13
Citrato de sodio 8.5 Agua destilada 1000 ml
Tiosulfato de sodio 8.5
AGAR SALMONELLA SHIGELLA

Agar Salmonella Shigella
El agar SS es un medio altamente selectivo, que inhibe el desarrollo de la mayoría de los
coliformes y permite el crecimiento de Salmonella y Shigella.
La alta concentración de sales biliares y citrato de sodio inhibe a todas las bacterias
Grampositivas y muchas Gramnegativas, incluyendo a los coliformes.
La lactosa es el único carbohidrato y el rojo neutro detecta la producción de ácido.
El tiosulfato de sodio es una fuente de S, permitiendo la detección del H2S por el
precipitado negro formado con el citrato férrico.
Colonias incoloras, son no fermentadores de lactosa y H2S (-), Salmonella y Shigella.
Las Colonias fermentadoras de lactosa se colorean de rojo, Escherichia coli.
Colonias incoloras con centro negro, son no fermentadores de lactosa y H2S (+), Proteus,
Salmonella.

1. COMPOSICION
Extracto de carne 1.0 g Agua destilada 1000 ml
D-Manitol 10 g Agar agar 15 g
Peptona 10.0 Rojo fenol 0.025 g
Cloruro de sodio 75 g
AGAR MANITOL SALADO ROJO FENOL

TRIPLE AZUCAR
HIERRO
T.S.I.
 A. INTRODUCCION
 La configuración del medio en pico de flauta
(Pico y Fondo) determina la existencia de 2
compartimientos La porción inclinada, expuesta
al oxígeno atmosférico es aerobia.
 - La porción inferior llamada fondo esta
protegida del aire y es relativamente anaerobia.
 La porción expuesta al oxigeno (INCLINADA),
tiende a tornarse alcalina por la
descarboxilación oxidativa de proteínas, y se
desarrolla un pH alcalino y se vuelve rojo.
 En el fondo del tubo donde no hay oxígeno , la
degradación proteica es mínima y se pueden
detectar incluso pequeñas cantidades de ácido
por la aparición de un color amarillo.
La producción de H2S se manifiesta por la producción de un color negro.
La presencia de gas se manifiesta por el resquebrajamiento del medio.
La acidez del medio se pone de manifiesto por un color amarillo y se representa por la letra A.
La alcalinidad del medio se pone de manifiesto por un color rojo y se representa por la letra K

TRIPLE AZUCAR
HIERRO
T.S.I.
 A. INTRODUCCION
 La configuración del medio en pico de flauta (Pico y Fondo)
determina la existencia de 2 compartimientos La porción
inclinada, expuesta al oxígeno atmosférico es aerobia.
 - La porción inferior llamada fondo esta protegida del aire y
es relativamente anaerobia.
 La porción expuesta al oxigeno (INCLINADA), tiende a
tornarse alcalina por la descarboxilación oxidativa de
proteínas, y se desarrolla un pH alcalino y se vuelve rojo.
 En el fondo del tubo donde no hay oxígeno , la degradación
proteica es mínima y se pueden detectar incluso pequeñas
cantidades de ácido por la aparición de un color amarillo.
La producción de H2S se manifiesta por la producción de un color negro.
La presencia de gas se manifiesta por el resquebrajamiento del medio.
La acidez del medio se pone de manifiesto por un color amarillo y se representa por la letra A.
La alcalinidad del medio se pone de manifiesto por un color rojo y se representa por la letra K

TRIPLE AZUCAR
HIERRO
T.S.I.
A/A Microorganismo fermentador de lactosa y
glucosa
Estos microorganismos que degradan lactosa y
glucosa producen cantidades grandes ácido por que
la concentración de lactosa es de 10/1 con respecto a
la glucosa. Esta cantidad de ácido es suficiente para
contrarrestar la reacción alcalina producida por la
degradación de las proteínas. Dando un color
amarillo en todo el medio.
CO2: Se observa resquebrajamiento del medio.
H2S: Se evidencia la producción de H2S por un
precipitado de color negro.

TRIPLE AZUCAR
HIERRO
T.S.I.
INTERPRETACION
 K/K: Microorganismo no fermentador
 Son incapaces de producir ácido por fermentación de la
glucosa o lactosa, no hay cambio en el medio.
 .

TRIPLE AZUCAR
HIERRO
T.S.I.
K/A Microorganismo no
fermentador de lactosa
 El microorganismo es capaz
de utilizar la glucosa pero
no a lactosa, por lo cual
produce una pequeña
cantidad de ácido, ya que la
concentración del medio es
de 0.1% de glucosa, por lo
cual al comenzar a
degradarse las proteínas
del pico se comienza a
liberar aminas lo que da un
color rojo en el pico. En el
fondo del tubo la
degradación proteica es
insuficiente para
contrarrestar el ácido
formado y se mantiene de
color rojo.

TRIPLE AZUCAR
HIERRO
T.S.I.
SIMBOLO:
INTERPRETACION
:
 Lactosa:
 Glucosa:
 CO2 ó Gas:
 H2S:

1. COMPOSICION
Peptona 3.0 g Tiosulfato de sodio 0.04 g
Extracto de levadura 3.0 g Púrpura de bromocresol 0.02g
Dextrosa 1.0 g Agar - Agar 15.0 g
Lisina 10.0 g Agua destilada 1000 ml
Citrato amonio férrico 0.5g
AGAR LIA

LISINA HIERRO AGAR
LIA
k/k
Microorganismo:
Lisina (+)
Descarboxilacion (+)
Desaminacion (-)

LISINA HIERRO AGAR
LIA
R/A
Microorganismo:
Lisina (-)
Descarboxilacion (-)
Desaminacion (+)

LISINA HIERRO AGAR
LIA
k/A
Microorganismo:
Lisina (-)
Descarboxilacion (-)
Desaminacion (-)

LISINA HIERRO AGAR
LIA
SIMBOLO:
INTERPRETACION:
 DESCARBOXILACIO
NDESAMINACION
 LISINA
 H2S

1. COMPOSICION
Peptona 10.0 g
Cloruro de sodio 9 g
CALDO PEPTONA

INDOLINTRODUCCION:
El indol, un bencilpirrol, es uno de los productos de degradación
metabólica del aminoácido triptofáno. Las bacterias que poseen la
enzima triptofanasa son capaces de hidrolizar y desaminar el
triptofáno con producción de indol, ácido pirúvico y amoniaco.
La prueba de indol esta basada en la formación de un complejo rojo
cuando el indol reacciona con el grupo del p-
dimetilaminobenzaldehido. Este es el principio activo del reactivo de
Kovac y Erlich. Debe emplearse un medio rico en triptofáno.

INDOL.
REACTIVO DE KOVAC
Alcohol amílico o isoamílico puro 150 ml
p-dimetilaminobenzaldehido 10 g
HCl concentrado 50 ml
TECNICA:
Inocular el caldo peptonado e incubar a 37ºC por 24 horas. Luego
añadir 5 gotas del reactivo por la pared del tubo.
INTERPRETACION:
Positivo: El desarrollo de un color rojo fucsia en la interfase del
reactivo y el caldo, indica la presencia del indol.

1. COMPOSICION
Citrato de sodio 2.0 g Azul de bromotimol 0.08 g
Fosfato monoamónico 1.0 g Fosfato dipotásico 1.0 g
Cloruro de sodio 5.0 g Agar - Agar 12.5 g
Sulfato de magnesio 0.2 g Agua destilada 1000 ml
AGAR CITRATO SIMMONS

Citrato de Simmons C.S.
INTRODUCCION
 El citrato de sodio es una sal del ácido cítrico, un
compuesto simple que constituye uno de los
metabolitos del ciclo de Krebs . Algunas bacterias
pueden obtener energía por vía distinta de la de
fermentación de hidratos de carbono, utilizando
citrato como única fuente de carbono. La
determinación de esta característica importante para
la identificación de muchas enterobacterias.
TECNICA
 Tomar una colonia bien aislada de la superficie de
un medio e inocular en una sola ,estría en el pico del
agro citrato e incubar a 37ºC por 24 - 48 horas.
INTERPRETACION
 El desarrollo de un color azul intenso en 24 a 48
horas indica una prueba positiva y revela que el
organismo en estudio ha sido capaz de utilizar el
citrato contenido en el medio, con la formación de
productos alcalinos.

1. COMPOSICION
Tripteina 1.0 g
Glucosa 1.0 g
Fosfato monopotasico 2 g
Agar - Agar 15 g
Rojo fenol 0.02 g
PREPARACION:
Suspender 24 g en 950 ml de agua. Esterilizar en autoclave
Agregar 50 ml de Urea al 40% por filtracion
AGAR UREA O CALDO UREA

1. FUNDAMENTO
AGAR UREA
En el medio de cultivo, la tripteína y la glucosa,
aportan los nutrientes para el desarrollo de
microorganismos.
El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el
rojo de fenol es el indicador de pH.
Algunas bacterias hidrolizan la urea por medio de la
enzima ureasa liberando amoníaco y dióxido de
carbono.
Estos productos alcalinizan el medio haciendo virar el
rojo de fenol del amarillo al rojo.
En este medio, la fermentación de la glucosa activa la
enzima ureasa, acelerando la velocidad del
metabolismo en aquellos organismos que hidrolizan
lentamente la urea, como especies de Enterobacter o
Klebsiella.

1. COMPOSICION
Peptona de caseina 20.0 g
Peptona de carne 6.6 g
Tiosulfato de sodio 0.2 g
Citrato hierro(III) amonio 0.2 g
Agar - agar 3.0 g
AGAR SIM

Agar S.I.M.
PRODUCCION DE H2S
Se evidencia la formación de ácido
sulfihidrico por la formación de un
precipitado negro. Esto se logra mediante
las siguientes etapas:
Liberación de sulfuro a partir del tiosulfato
por acción enzimática de la bacteria.
Acoplamiento del sulfuro (S-2
) con el ion
hidrogeno (H+
) para formar gas H2S.
Detección del gas H2S mediante sales de
metales pesados como hierro, logrando la
forma de sulfuro del hierro, que es un
precipitado negro.
Este medio de cultivo permite comprobar la formación de sulfuro, la producción de
indol y observar la movilidad.

Agar S.I.M.
MOVILIDAD
Los medios para detectar movilidad
contienen concentraciones de agar de 0.4%
o menos. A mayor concentración del gel es
demasiado firme como para permitir la
diseminación de los organismos.
La Motilidad se pone de manifiesto por la
turbidez difusa del medio de cultivo alrededor
del canal de la picadura.
 La no motilidad se caracteriza por el
crecimiento producido exclusivamente a lo
largo de dicho canal.
INDOL
Después de agregar unas gotas del reactivo
de kovacs, si aparece un color rojo-cereza
dela capa del reactivo indica la presencia de
Indol.

1. COMPOSICION
Peptona de caseina 7.0 g
Dextrosa 5.0 g
Fosfato dipotásico 5.0 g
CALDO MRVP

Rojo de Metilo R.M.
INTRODUCCION
El rojo de metilo es un indicador de pH con un intervalo entre 6.0 (amarillo) y
4.4. (rojo). El pH al cual el rojo de metilo detecta ácido es considerablemente
menor que el de otros indicadore. A fin de provocar un cambio de color, el
organismo en estudio debe producir grandes cantidades de ácido a partir del
sustrato hidrocarbonado que emplea.
La prueba del R.M. detecta la producción de ácido y requiere de organismos
positivos que produzcan ácidos fuertes (láctico, fórmico, acético) a partir de
glucosa, por la vía de la fermentación ácida mixta.
COMPOSICION
CALDO MRVP: ROJO DE METILO (Indicador)
Rojo de metilo 0.1 g
Etanol al 95% 300 ml
Agua destilada 200 ml.
TECNICA
Inocular el caldo MRVP e Incubar a 37ºC por 24 horas, agregar 5 gotas del
reactivo rojo de metilo.
INTERPRETACION
Positivo: El desarrollo de un color rojo en el medio indica que la producción
de ácido es suficiente como para bajar el pH a 4.4.

Voges Proskauer V.P.
INTRODUCCION
El ácido pirúvico, componente fundamental formado en la degradación
fermentativa de la glucosa, es metabolizado luego a través de varias vías, de
acuerdo con los sistemas enzimáticos que poseen las diferentes bacterias. Una de
dichas vías lleva a la producción de acetoína (acetilmetilcarbinol), un subproducto
de reacción neutra de la vía Butilenglicol. Los organismos que producen acetoína
como principal subproducto del metabolismo de la glucosa y forman cantidades
menores de ácidos mixtos. En presencia de oxígeno atmosférico e KOH al 40% , la
acetoina se convierte en diacetilo y el alfa naftol actúa como catalizador para
revelar un complejo de color rojo.
COMPOSICION
ALFA-NAFTOL KOH
Alfa naftol 5 g KOH 40 g
Alcohol etílico absoluto 100 ml Agua 100 ml
TECNICA
Inocular caldo MRVP e incubar a 37ºC por 24 horas. Luego añadir alfa naftol e
KOH al 40%. agitar el tubo y dejarlo en reposo por l0 minutos.
INTERPRETACION
Positivo: desarrollo de un color rojo a los l0 minutos, revelando la presencia de
diacetilo, producto de oxidación de la acetoína.

I.M.V.I.C.
INDOL
ROJO DE METILO
VOGES PROSKAUER
CITRATO DE SIMMONS

I.M.V.I.C.
 Cuando se realizan estas cuatro pruebas simultáneamente, constituyen las
clasicas reacciones IMVIC.
 Indol: la formación de Indol a partir del triptófano se indica por un color rojo
después del agregado del reactivo Kovacs.
 Rojo de Metilo: la aparición de un color rojo en el tuno con caldo MRVP,
después de agregar unas gotas del reactivo rojo de metilo indica un
descenso del pH a 4.4 o menos, indicativo de la presencia de fuertes
fermentadores productores de ácidos mixtos.
 Voges Proskauer: la aparición de un color rojo en el tubo con caldo
MRVP, después de agregar alfa-naftol e KOH al 40%, indica la presencia
de acetoína producida a partir del piruvato por la vía del butilenglicol.
 Citrato de Simmons: el viraje del indicador azul de bromotimol a un color
azul alcalino indican que el microorganismo puede utilizar el citrato de sodio
como única fuente de carbono.

12
a. Medio de cultivo
b. Símbolo
c. Interprete el resultado
d. Indicador

I.M.V.I.C.
Indol:
Rojo de Metilo:
Voges Proskauer:
Citrato de Simmons:
Indol:
Rojo de Metilo:
Voges Proskauer:
Citrato de Simmons:

DIFERENCIACION
BIOQUIMICA
 TSI
 LIA
 Indol
 Rojo de Metilo
 Voges Proskauer

1. COMPOSICION
Infusión cerebro de ternera 20.0 g Fosfato disódico 2.5 g
Infusión corazón de res 25.0 g Glucosa 2.0 g
Peptonas 10.0 g Agua destilada 1000 ml
INFUSION CEREBRO CORAZON (BHI)

1. COMPOSICION
AGAR SANGRE

1. COMPOSICION
AGAR CHOCOLATE

1. COMPOSICION
Peptona 10.0 g
Dextrosa 40.0 g
Agar - Agar 12.5 g
AGAR SABAURAUD

Agar Xilosa Lisina
Desoxicolato XLD
 Agar XLD con colonias de especies de
Enterobacterias fermentadoras de lactosa.
 Los hidratos de carbono son: Xilosa,
Lactosa y Sacarosa.
 El indicador es el rojo fenol.
 Las colonias que fermentan uno o más de
estos hidratos de carbono producen ácido,
son de color amarillo claro, debido a que
hacen virar el color del agar adyacente del
rosa al amarillo.
 Los microorganismos como Escherichia
coli, Klebsiella y Enterobacter pueden
utilizar más de un hidrato de carbono y
forman colonias color amarillo brillante.

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