Shpt chẩn-đoán-bệnh-final
•Télécharger en tant que PPTX, PDF•
1 j'aime•356 vues
Ứng dụng SHPT trong chẩn đoán bệnh ở người
Recommandé
Recommandé
Contenu connexe
Tendances
Tendances (19)
Similaire à Shpt chẩn-đoán-bệnh-final
Similaire à Shpt chẩn-đoán-bệnh-final (20)
Dernier
Dernier (20)
Shpt chẩn-đoán-bệnh-final
- 1. Cơ sở khoa học và ứng dụng sinh học phân tử trong chẩn đoán bệnh ở người GVHD : PGS.TS Trương Quốc Phong Nhóm thực hiện : Tạ Thị Bình Nguyễn Hà Ngọc Anh Trần Lương Nguyên Nguyễn Thị Thùy Linh Đặng Kiều Ly
- 2. Mục lục 1. Chẩn đoán dựa trên nền Genomics 2. Chẩn đoán trên nền Proteomics 3. Kết luận
- 3. 1 Chẩn đoán trên nền Genomics
- 4. Lịch sử giải trình tự
- 5. 1.1 Kỹ thuật giải trình tự gen Pyrosequencing ◉ Pyrosequencing là phương pháp xác định trình tự nucleotide dựa vào phản ứng dây chuyền khi pyrophosphate (PPi) được giải phóng, tạo ra tín hiệu ánh sáng khác nhau với các loại nucleotide khác nhau.
- 6. 1.1 Kỹ thuật giải trình tự gen Pyrosequencing
- 7. Phát hiện các đột biến DNA trong ung thư Pyrosequencing Chẩn đoán bệnh não và thần kinh Chẩn đoán bệnh di truyền Xác định type và các allel kháng nguyên bạch cầu người HLA có liên quan đến bệnh Chẩn đoán nhiễm virus, vi khuẩn và nấm
- 8. 1.2 PCR ◉ Là phương pháp khuếch đại gen mà không sử dụng sinh vật sống. ◉ Thành phần: 1. DNA khuôn 2. 2 loại mồi xuôi, ngược 3. Enzym DNA polymerase 4. dNTP 5. Dung dịch đệm
- 9. Các giai đoạn của PCR Gắn mồi 55-65oC 30s - 1 phút Kéo dài mạch 70-75oC 30+ phút Biến tính 94-95oC 5 phút Biến tính ban đầu 94-95oC 5 phút Kéo dài mạch 70-75oC 30+ phút Bảo quản 4 - 15oC ∞
- 11. PCR trong chẩn đoán lao ◉ Lao là tình trạng nhiễm vi khuẩn Mycobacteriumtuberculosis ◉ Là bệnh truyền nhiễm ◉ Tại Việt Nam, có 9 triệu ca mắc bệnh Lao và 1,5 triệu ca tử vong (2013) ◉ Việt Nam xếp thứ 13 trong số 22 nước có gánh nặng bệnh Lao cao nhất thế giới ◉ Nguyên lý: Kỹ thuật PCR dùng để phát hiện trình tự 249 cặp bazơ nằm trên đoạn IS 6110 (primer INS2 và PT18) GCGTAGGCGTCGGTGACAAAG GCCACGTAGGCGAACCCTGCC CAGGTCGACACATAGGTGAGG TCTGCTACCCACAGCCGGTTA GGTGCTGGTGGTCCGAAGCGG CGCTGGACGAGATCGGCGGGA CGGGCTGTGGCCGGATCAGCG ATCGTGGTCCTGCGGGCTTTG CCGCGGGTGGTCCCGGACAG GCCGAGTTTGGTCATCAGCCG TTCGACGGTGCATCTGGCCAC CTCGATGCCCTCACGGTTC
- 12. Ưu, nhược điểm ◉ Ưu điểm: độ nhạy và độ đặc hiệu rất cao, kết quả nhanh (24-48 giờ), có thể tiến hành trên nhiều loại bệnh phẩm khác nhau (đờm, dịch phế quản, dịch màng phổi, dịch não tuỷ .v.v.) ◉ Nhược điểm: giá thành đắt, đòi hỏi trang bị tốn kém
- 13. Cách thực hiện Yêu cầu: Tiến hành tại 3 phòng thí nghiệm khác nhau và theo nguyên tắc lưu thông một chiều ◉ B1: Pha chế hỗn hợp dịch nền mix để chạy PCR ◉ B2: Xử lý bệnh phẩm: Ly tâm, giữ ở 100oC, 10 phút ◉ B3: Tách DNA của vi khuẩn lao ◉B4: Chuẩn bị đồng thời 4 mẫu - Mẫu dịch thí nghiệm - Mẫu kiểm tra dịch & DNA M.smegmatis đã gắn IS6110 - Ống chứng dương : ADN của M. tuberculosis 10-12g/ml - Ống chứng âm : 10 ml d2 TE
- 14. B5: Chạy PCR - Tách mạch ban đầu ở 94oC trong 5 phút - Chạy 40 chu kỳ, mỗi chu kỳ gồm: + 94oC trong 40 giây + Ủ primer ở 68oC trong 1 phút + Kéo dài ở 72oC trong 20 giây - Kéo dài cuối cùng ở 72oC trong 5 phút
- 15. ◉ B6: Điện di sản phẩm Sản phẩm PCR được điện di trên gel agarose 2% (2 gr agarose/100 ml đệm TBE pH 8,3 với 0,89M Tris, 0,89M axit boric và 0,02 EDTA): 20ul/giếng, ở hiệu điện thế 110V, dòng điện 40 mA, từ 30 đến 45 phút. Gel được lấy ra và nhuộm trong dung dịch ethidium bromide 0.2mg/ml (20 phút) ◉ B7: Đọc kết quả Soi gel dưới đèn UV, chụp ảnh bằng phim Polaroid
- 17. Chẩn đoán dựa trên nền Proteomics2
- 18. Thống kê So sánh Cơ sở Hệ thống Protein phức tạp là nguồn biomarker dồi dào. Được sử dụng chủ yếu để chẩn đoán sớm các loại ung thư Các phương pháp nhận diện phổ biến: Khối phổ(MS), MALDI-MS, SELDI-MS, ESI-MS,… Hệ thống Protein
- 19. Kỹ thuật khối phổ (MS) Dựa trên đặc trưng tỷ lệ khối lượng/điện tích của hạt Nguyên tắc: Đo gián tiếp m/z qua bán kính của hạt khi được cung cấp năng lượng, di chuyển trong từ trường 𝐹 = 𝑞𝑣𝐵𝑠𝑖𝑛𝜑 = 𝑚𝑣2 𝑟 𝑣 = 2𝑞𝐸 𝑚 𝑟 = 2𝑚𝐸 𝑞𝐵2 r B v
- 21. Kết luận Ứng dụng sinh học phân tử trong chẩn đoán bệnh có phổ sử dụng cao và đặc hiệu, chắc chắn sẽ được phát triển nhiều trong tương lai Ưu điểm Nhược điểm o Nhanh chóng o Có độ chính xác cao o Phù hợp với từng người bệnh riêng biệt o Giá thành cao o Đòi hỏi trang thiết bị đắt tiền
- 22. Tài liệu tham khảo ◉Kỹ thuật PCR trong chẩn đoán lao, Viện vệ sinh dịch tễ trung ương ◉Mycobacterium tuberculosis IS6110 genes, GenBank AJ242908.1 ◉Yu LR, Zhou M, Conrads TP, Veenstra TD. “Diagnostic proteomics: serum proteomic patterns for the detection of early stage cancers.” Dis Markers. 19(4-5):209-18. PMC. Web, 18 Oct 2017 ◉https://www.khanacademy.org/science/chemistry/atomic- structure-and-properties/mass-spectrometry/a/isotopes-and-mass- spectrometry