1. ‫تقديم‬:
‫غمكين‬‫ي‬ ‫القاض‬ ‫محمد‬ ‫و‬ ‫حسن‬
‫الجذعية‬ ‫الخاليا‬ ‫وفصل‬ ‫عزل‬
‫من‬‫الجذعية‬ ‫الخاليا‬‫املبادىء‬‫االساسية‬
‫العالجية‬ ‫التطبيقات‬ ‫الى‬

2. ‫الجذعية‬ ‫الخاليا‬ ‫عزل‬ ‫طرق‬
‫الخواص‬‫على‬‫املعتمدة‬‫الفصل‬‫ق‬‫طر‬‫الفيزوكيميائية‬:
‫بواسطة‬‫الفصل‬‫التثفيل‬
‫على‬‫اعتمادا‬ ‫الفصل‬‫ة‬‫ر‬‫القد‬‫االلتصاقية‬‫للخاليا‬

3. ‫بواسطة‬ ‫الفصل‬‫التثفيل‬
‫ماهو‬‫؟‬ ‫التثفيل‬

4. Differential centrifugation
*‫ف‬ ‫جيدا‬ ‫فصل‬ ‫تعطي‬ ‫ال‬ ‫تقليدية‬ ‫طريقة‬‫حالة‬ ‫ي‬
‫بالكثافة‬ ‫المتقاربة‬ ‫والمواد‬ ‫الخاليا‬
*‫مخت‬ ‫بسرعات‬ ‫مرات‬ ‫عدة‬ ‫للتثفيل‬ ‫وتحتاج‬‫لفة‬
*‫للتثفيل‬ ‫اخرى‬ ‫طرق‬ ‫عدة‬ ‫تطوير‬ ‫تم‬
‫التثفيل‬ ‫منها‬‫بمدروج‬‫التراكيز‬
Density gradient centrifugation

5. Density gradient centrifugation
*‫الفصل‬ ‫انبوب‬ ‫ضمن‬ ‫متدرجة‬ ‫كثافته‬ ‫تكون‬ ‫ضمنه‬ ‫التثفيل‬ ‫يتم‬ ‫الذي‬ ‫المحلول‬.

6. ‫قسمين‬ ‫الى‬ ‫التثفيل‬ ‫من‬ ‫النوع‬ ‫هذا‬ ‫يقسم‬:
• rate-zonal centrifugation “discontinuous”
• Isopycnic centrifugation “continuous”
Density gradient centrifugation
50
30
10

7. Density gradient centrifugation
particles are separated solely on the basis of
their density
Isopycnic = same density

8. *‫التثفيل‬ ‫بواسطة‬ ‫الدموية‬ ‫الجذعية‬ ‫الخاليا‬ ‫فصل‬:

9. ‫الجذعية‬ ‫الخاليا‬‫الميزنشيمية‬
Mesenchymal Stem cell
Adipose-derived stem cells: Isolation, expansion and
differentiation
‫ميكانيكية‬ ‫طرقة‬ ‫انزيمية‬ ‫طرقة‬
‫كريات‬ ‫حل‬ ‫محلول‬
‫الحضن‬
‫التثفي‬‫ل‬
‫الزرع‬
‫التحريك‬
‫محلول‬ ‫مع‬ ‫الحضن‬
‫الكريات‬ ‫حل‬
‫التثفي‬‫ل‬
‫الزرع‬
‫التثفي‬‫ل‬
‫الفلتر‬‫ة‬
‫االنزيم‬ ‫اضافة‬
‫ساعة‬ ‫لمدة‬ ‫الحضن‬

10. ‫الزرع‬ ‫على‬ ‫اعتمادا‬ ‫الفصل‬
‫القدرة‬ ‫على‬ ‫اساسي‬ ‫بشكل‬ ‫تعتمد‬‫االلتصاقية‬‫للخاليا‬
‫سطحية‬ ‫لجزيئات‬ ‫امتالكها‬ ‫نتيجة‬
‫اكثر‬‫مايعزل‬‫الجذعية‬ ‫الخاليا‬ ‫هو‬ ‫الطريقة‬ ‫بهذه‬‫الميزنشيمية‬
Mesenchymal Stem/Stromal Cells (MSC)

11. ‫الزرع‬ ‫على‬ ‫اعتمادا‬ ‫الفصل‬
‫الجذعية‬ ‫الخاليا‬ ‫تؤخذ‬‫الميزنشيمية‬Mesenchymal Stem‫من‬:
‫النقي‬ ‫بذل‬
‫شحمي‬ ‫نسيج‬
‫السري‬ ‫الحبل‬ ‫دم‬

12. ‫الجذعية‬ ‫الخاليا‬‫الميزنشيمية‬
Mesenchymal Stem cell
Adipose-derived stem cells: Isolation, expansion and
differentiation
‫ميكانيكية‬ ‫طرقة‬ ‫انزيمية‬ ‫طرقة‬

13. ‫عزل‬ ‫طريقة‬:
•‫النسيج‬ ‫عزل‬
•‫هضم‬‫بالكوالجيناز‬
•‫تثفيل‬
«‫تطفو‬ ‫الشحم‬ ‫من‬ ‫كبيرة‬ ‫كمية‬ ‫تحوي‬ ‫التي‬ ‫الخاليا‬»
‫حبيبات‬ ‫تشكل‬ ‫الجذعية‬ ‫السلفية‬ ‫الخاليا‬«‫رسابة‬»‫طبق‬ ‫على‬ ‫تزرع‬
‫زرع‬.

14. ‫بالغشاء‬ ‫الفلترة‬
Membrane Filtration
‫خاصتي‬ ‫على‬ ‫تعتمد‬ ‫وبسيطة‬ ‫سهلة‬
‫خالل‬ ‫المرور‬ ‫على‬ ‫والقدرة‬ ‫االلتصاق‬
‫االغشية‬ ‫مسامات‬«‫الحجم‬»
‫الدموية‬ ‫الجذعية‬ ‫الخاليا‬ ‫على‬ ‫طبقت‬CD34
“enrichment”

15. Affinity-based techniques
‫االلفة‬ ‫على‬ ‫المعتمدة‬ ‫الطرق‬
‫رئيسي‬ ‫بشكل‬ ‫تقنتين‬ ‫تتضمن‬:
Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS)
‫الخلوي‬ ‫الجريان‬ ‫بواسطة‬ ‫الفرز‬
Immunomagnetic Cell Separation
‫المغناطيسية‬ ‫الجزيئات‬ ‫على‬ ‫المعتمد‬ ‫الفرز‬
‫جزيئات‬ ‫على‬ ‫رئيسي‬ ‫بشكل‬ ‫تعتمدان‬marker‫سطحية‬
‫اهمها‬ ‫من‬cluster of differentiation “CD”

16. Surface molecular marker

17. ‫الخلوي‬ ‫الجريان‬
‫مستضد‬ ‫مع‬ ‫ضد‬ ‫ارتباط‬ ‫صورة‬
‫للجهاز‬ ‫صورة‬

18. Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS) :

19. Immunomagnetic Cell Separation
Magnetic-activated cell sorting (MACS)
‫مع‬ ‫مرتبطة‬ ‫صغيرة‬ ‫مغناطيسية‬ ‫جزيئات‬ ‫تستعمل‬‫االضداد‬

20. ‫الطرق‬ ‫تقييم‬.
‫والفلترة‬ ‫والزرع‬ ‫التثفيل‬‫باالغشية‬:
‫بسيطة‬ ‫طرق‬–‫معقدة‬ ‫اجهزة‬ ‫تحتاج‬ ‫ال‬–‫ورخيصة‬-
‫واسع‬ ‫مستوى‬ ‫على‬ ‫تطبيقها‬ ‫يمكن‬
‫التعطي‬‫ف‬ ‫اولية‬ ‫كخطوة‬ ‫تستخدم‬ ‫عالي‬ ‫نوعي‬ ‫فصل‬‫ي‬
‫الجذعية‬ ‫الخاليا‬ ‫عزل‬ ‫عملية‬
‫المغناطيسي‬ ‫والفصل‬ ‫الخلوي‬ ‫الجريان‬:
‫االض‬ ‫من‬ ‫مزيج‬ ‫نستخدم‬ ‫ان‬ ‫يمكن‬ ‫للفصل‬ ‫عالية‬ ‫نوعية‬ ‫تعطي‬‫داد‬
‫ومعدات‬ ‫ألجهزة‬ ‫تحتاج‬«‫الخلوي‬ ‫الجريان‬»
‫لل‬ ‫السطحية‬ ‫بالجزيئات‬ ‫جيدة‬ ‫معرفة‬ ‫هناك‬ ‫تكون‬ ‫الن‬ ‫تحتاج‬‫خاليا‬
‫ل‬ ‫البيولوجية‬ ‫الخواص‬ ‫من‬ ‫تغير‬ ‫قد‬ ‫المغناطيسية‬ ‫الجزيئات‬‫لخاليا‬

21. ‫مائيين‬‫ين‬‫ر‬‫طو‬ ‫على‬‫املعتمدة‬ ‫فصل‬ ‫تقنية‬ATPS
Aqueous Two-Phase Systems (ATPS)
‫غير‬ ‫مائيين‬ ‫وسطين‬ ‫وجود‬ ‫على‬ ‫تعتمد‬ ‫استخالص‬ ‫تقنية‬‫مزوجين‬
polymer–polymer and polymer–salt systems.
Most commonly used polymers include :
polyethylene glycol (PEG) and dextran
salts are phosphates, sulfates, and citrates

22. defined by their physicochemical properties such as
hydrophobicity, size, and net surface charge
‫العملية‬ ‫لتحسين‬ ‫اضداد‬ ‫اضافة‬ ‫يمكن‬.

23. based on cellular morphological and biophysical differences
such as mass, charge, size, density, shape, and rigidity. FFF is
achieved within an empty capillary channel by the combined
action of a transporting laminar flow of mobile phase and a
field that is applied perpendicularly to the flow
Field Flow Fractionation “FFF”

24. ‫التثفيل‬
‫والفلترة‬ ‫ع‬‫ر‬‫الز‬
‫املغناطيسية‬‫والجزيئات‬ ‫ي‬‫الخلو‬ ‫الجريان‬
‫وطريقة‬ ‫االستخالص‬ATPS
‫على‬‫معتمدة‬‫طريقة‬Field Flow Fractionation “FFF”
‫التثفيل‬
‫والفلترة‬ ‫ع‬‫ر‬‫الز‬
‫املغناطيسية‬‫والجزيئات‬ ‫ي‬‫الخلو‬ ‫الجريان‬
‫وطريقة‬ ‫االستخالص‬ATPS
‫على‬‫معتمدة‬‫طريقة‬Field Flow Fractionation “FFF”
‫الجذعية‬ ‫الخاليا‬ ‫ل‬‫عز‬‫ق‬‫وطر‬ ‫تقنيات‬