Medios de cultivo para el crecimiento de microorganismos

“AÑO DE LA INTEGRACIÓN NACIONAL Y EL RECONOCIMIENTO DE
NUESTRA DIVERSIDAD”
Universidad Nacional
“Hermilio Valdizán”
FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS
E.A.P. AGRONOMÍA
DOCENTE : Ing. MARIA GUTIEREZ SOLORZANO
CURSO : MICROBIOLOGIA Y NEMATOLGIA AGRICOLA
INTEGRANTES:
DURAN VILLANUEVA JORGE LUIS
HUARAUYA GERONIMO ADRIANO EDGAR
ESPINOZA FIRMA BEATRIZ
RODRIGUEZ ARTETA JAUN
AÑO/ SEMESTRE : tercero - VI
HUÁNUCO – PERÚ
2013-I
INFORME DE PRACTICAS DE MICROBIOLOGIA

MEDIOS DE CULTIVO
1. DEFINICIONES
(Eduardo y Teddy 1980: 33) sostienen las siguientes
definiciones:
MEDIOS DE CULTIVO
Son soluciones estériles que tienen macro y
micronutrientes, sustancias que permiten el crecimiento
de organismos.
Un medio de cultivo es un sustrato o una solución
de nutrientes que permite el desarrollo de
microorganismos. En las condiciones de laboratorio para
realizar un cultivo, se debe sembrar sobre el medio de
cultivo elegido las muestras en las que los
microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar
colonias
LOS MICROORGANISMOS
Son los seres más abundantes de la tierra, pueden
vivir en condiciones extremas de pH, temperatura y
tensión de oxígeno, colonizando una amplia diversidad
de nichos ecológicos. Entre los requerimientos más
importantes para su desarrollo están el carbono, el
oxígeno, nitrógeno, dióxido de carbono e hidrógeno.
Muchas bacterias sin embargo necesitan del aporte extra
de factores de crecimiento específicos en forma de
suero, sangre y extracto de levadura entre otros.
CULTIVO
Es el producto del crecimiento de organismos o
grupos de organismos, establecidos con fines
experimentales o industriales.

CULTIVO PURO
Es la presencia de una sola especie de
microrganismo libre de todo contaminante, a esto que
también se le denomina AXENICO.
OBJETIVO
Aprender la clasificación y uso de los medios de
cultivo.
Preparar medios de cultivo y manejar adecuadamente
la autoclave.
PROCEDIMIENTO
1) Sacar las proporciones.
2) Pesar sustancias.
3) Medir el agua destilada y trasvasarlo a matraz de
Erlenmeyer.
4) Homogenizar las sustancias más el agua
5) Hervir, este proceso se realiza de acuerdo a que medio
se va a preparar.
6) Añadir y homogenizar las sustancias, hasta disolver las
sustancias.
7) Trasvasar a la botella.
8) Acondicionar el medio.
9) Rotular
10) Esterilizar (autoclave)
11) usar el medio de cultivo.

AGENTES SOLIDIFICANTES
1. AGAR-AGAR
(Eduardo y Teddy 1980: 34) refiere que el agar
agar es una gelatina vegetal, un polisacárido que se
extrae de las algas por medio del ácido sulfúrico
diluido a una temperatura de 80 ºC. La especie de
producción comercial se extrae de las siguientes
especies: Gelidium corneum; gracillaria; gigartina y
pterocladia.
PROPIEDADES
(Eduardo y Teddy 1980: 35) indica las propiedades
del agar agar:
 Se derrite a 80 -100 ºC. Tolera altas temperaturas
de esterilización sin descomponerse.
 Se solidifica a 35 – 50 ºC.
 Adquiere firmeza en medios de cultivos a
concentraciones de 1,5 a 2,0 %.
 Se hidroliza a pH de 2 y pH 9. Su valor nutritivo
es casi nulo y contiene algunos factores de
crecimiento.
2. GELATINA
(Eduardo y Teddy 1980: 35) es una sustancia
derivada de huesos, ligamentos y piel de animales, por
ebullición de ácido clorhídrico diluido.

Propiedades
 Se derrite a 37 ºC
 Se solidifica a 20 a 25 ºC, usando 10 a 12 % en
solución y también se derrite a esa temperatura.
 Se descompone a 121 ºC y es digerida por los
microorganismos.
 A pH extrema se hidroliza.
 A pH ácidos no se solidifica.
TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVOS
POR SU CONSISTENCIA:
1. Líquidos
(Eduardo y Teddy 1980: 35) indican que los medios
líquidos se usan en principalmente en el incremento de
bacterias, en la determinación de sus propiedades
fisiológicas, para el incremento masivo de bacterias y
hongos con fines de experimentales (generalmente bajo
agitación) y para estudios de crecimiento de
microorganismos. Industrialmente tienen uso en la
preparación de productos accesorios al crecimiento los
microorganismos, (ácidos orgánicos, antibióticos,
etc.).
2. Sólidos
(Eduardo y Teddy 1980: 35) también sostiene que el
uso de principal de medios solidos es para el aislamiento
de hongos y bacterias, y para su mantenimiento. Se prepara
en frascos, placas Petri y tubos de prueba.

SEGÚN SUS PROPIEDADES NUTRITIVAS
(Eduardo y Teddy 1980: 35) indican las siguientes
propiedades:
A. CARENTES DE NUTRIENTES
Agua
El agua es para el mantenimiento de bacterias en
estado latente e inmutable, o clamidosporas de fusarium
(el agua destilada en destiladores metálicos es a veces
toxico y letal para las bacterias; es preferible usar
agua desmineralizada o agua potable no clorinada).
Sustancias que son carentes de nutrientes:
 Laboratorio
 Caño
 Destilatorio
 Dicionizada
 Agar agua (sustancia solida)
 Nitrógeno líquido: componente para mantener y
preservar sustancias como semen de animales.
B. NUTRITIVAS
1. NATURALES
Constituyen únicamente de material vegetal natuarl
2. SEMISINTETICOS COMPLEJOS
El componente posee 50 % natural y 50 % de
sustancias químicas.

3. SINTÉTICOS DEFINIDOS
Es químicamente definido.
PROCEDIMIENTO EN LA PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVOS
Se realiza el cálculo de la proporciones para 500
ml de preparado del medio del cultivo, utilizando 1
litro de agua destilada.
1. Sacar las proporciones
A. PDA (PAPA AGAR DEXTROSA)
 PAPA: 200 gramos.
 DEXTROSA: 10 gramos.
 AGAR - AGAR: 15-18 gramos.
 EXTRACTO DE CARNE: 5 gramos.
 AGUA DESTILADA: 1000 ml/ 1lt.
500 ml de preparado
Proporciones para preparado de 1 litro de medio
del cultivo
 PAPA: 𝟐𝟎𝟎𝒈𝒓 → 𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯 𝟐 𝑶
𝑿 → 𝟓𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯 𝟐 𝑶
𝑿 = 𝟏𝟎𝟎 𝒈𝒓𝒂𝒎𝒐𝒔.
 DEXTROSA:
𝟏𝟎𝒈𝒓 → 𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯 𝟐 𝑶
𝑿 → 𝟓𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯 𝟐 𝑶
𝑿 = 𝟓 𝒈𝒓𝒂𝒎𝒐𝒔.
 AGAR - AGAR:
𝟏𝟓𝒈𝒓 → 𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯 𝟐 𝑶

𝑿 → 𝟓𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯 𝟐 𝑶
𝑿 = 𝟕. 𝟓 𝒈𝒓𝒂𝒎𝒐𝒔.
 EXTARCTO DE CARNE:
𝟓𝒈𝒓 → 𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯 𝟐 𝑶
𝑿 → 𝟓𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯 𝟐 𝑶
𝑿 = 𝟐. 𝟓 𝒈𝒓𝒂𝒎𝒐𝒔.
PREPARADO DEL MEDIO DE CULTIVO
I. PDA (AGAR PAPA DEXTROSA).
PROCEDIMIENTO
1. proporciones para preparado de 115 ml.
 PAPA: 𝟐𝟎𝟎𝒈𝒓 → 𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯 𝟐 𝑶
𝑿 → 𝟏𝟏𝟓𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯 𝟐 𝑶
𝑿 = 𝟐𝟑 𝒈𝒓𝒂𝒎𝒐𝒔.
 DEXTROSA:
𝟏𝟎𝒈𝒓 → 𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯 𝟐 𝑶
𝑿 → 𝟏𝟏𝟓𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯 𝟐 𝑶
𝑿 = 𝟏. 𝟏𝟓 𝒈𝒓𝒂𝒎𝒐𝒔.
 AGAR AGAR:
𝟏𝟓𝒈𝒓 → 𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯 𝟐 𝑶
𝑿 → 𝟏𝟏𝟓𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯 𝟐 𝑶
𝑿 = 𝟏. 𝟕𝟐𝟓 𝒈𝒓𝒂𝒎𝒐𝒔.
 EXTARCTO DE CARNE:
𝟓𝒈𝒓 → 𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯 𝟐 𝑶
𝑿 → 𝟏𝟏𝟓𝒎𝒍 𝒅𝒆 𝑯 𝟐 𝑶

𝑿 = 𝟎. 𝟓𝟕𝟓 𝒈𝒓𝒂𝒎𝒐𝒔.
2. LAVADO, PELADO Y PICADO DE PAPA
FIGURA 1
FIGURA 2
3. PESADO DE SUSTANCIAS
FIGURA 3

4. MEDIR AGUA DESTILADA
FIGURA 4
5. HOMOGENIZAR EL AGUA MÁS LA PAPA
FIGURA 5

6. HERVIR: durante 30 minutos
FIGURA 6
7. COLAR: con gaza o tamiz ( si hubiera)

FIGURA 7
8. HOMOGENIZAR LA SOLUCIÓN DE PAPA MÁS OTROS COMPONENTES
QUÍMICOS, HASTA DISOLVER LAS PARTÍCULAS.
FIGURA 8

9. TRASVASAR: se transfiere del matraz a la botella antes
que se enfrié el medio.
FIGURA 9

10. ACONDICIONAR: (con una torunda de algodón y sobre
ello sellarlo con parafilm)
11. ROTULAR
12. USAR
II. OMA (OAL MEAL AGAR)

(Sifuentes 1990: 9) es medio de cultivo adecuado
para Pythium sp, Phytophthora sp, Fusarium sp., Phoma
sp, y otros patógenos.
Ingredientes
 Quaker: 20 – 60 g.
 Dextrosa: 10 g.
 Agar: 15 – 18 g.
 Agua destilada: 1000 ml.
Para preparado de 100 ml.
1. CALCULO DE PROPORCIONES
 Quaker: 20𝑔𝑟 → 1000𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝐻2 𝑂
𝑋 → 100 𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝐻2 𝑂
𝑋 = 200 𝑔𝑟𝑎𝑚𝑜𝑠.
 Dextrosa: 10𝑔𝑟 → 1000𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝐻2 𝑂
𝑋 100𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝐻2 𝑂
𝑋 1 𝑔𝑟𝑎𝑚𝑜.
 Agar - Agar: 15𝑔𝑟 → 1000𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝐻2 𝑂
𝑋 100 𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝐻2 𝑂
𝑋 15 𝑔𝑟𝑎𝑚𝑜𝑠.
2. PESO DE SUSTANCIAS
FIGURA 1

3. MEDIR AGUA DESTILADA
4. Medir el agua destilada

5. HOMOGENIZAR
6. HERVIR: este proceso tiene una duración de 30 a
45 minutos, removiendo constantemente, para
evitar la ebullición.

7. HOMOGENIZAR HASTA DISOLVER LAS OTRAS
PARTICULAS.
8. HOMOGENIZAR LA SOLUCIÓN DE PAPA MÁS OTROS
COMPONENTES QUÍMICOS, HASTA DISOLVER LAS
PARTÍCULAS.

9. TRASVASAR
13. ACONDICIONAR (con una torunda de algodón y sobre
ello sellarlo con parafilm).

III. AGAR HARINA DE MAÍZ (AHM)
(Eduardo y Teddy 1980: 38) menciona que es útil
para el aislamiento y esporulación de algunas especies
de Phytophthora.
PROCEDIMIENTO
1) CALCULO DE PROPORCIONES
Harina de maíz:
1000 𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝑎𝑔𝑢𝑎 𝑑𝑒𝑠𝑡𝑖𝑙𝑎𝑑𝑎 − − − − − − − − − −20𝑔𝑟. 𝑑𝑒 ℎ𝑎𝑟𝑖𝑛𝑎
600 𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝑎𝑔𝑢𝑎 𝑑𝑒𝑠𝑡𝑖𝑙𝑎𝑑𝑎 − − − − − − − − − − − − − 𝑋
𝑿 = 𝟏𝟐𝒈𝒓. 𝒅𝒆 𝒉𝒂𝒓𝒊𝒏𝒂 𝒅𝒆 𝒎𝒂í𝒛
Para dextrosa:
1000𝑚𝑙. 𝑑𝑒 𝑎𝑔𝑢𝑎 𝑑𝑒𝑠𝑡𝑖𝑙𝑎𝑑𝑎 − − − − − − − 10𝑔𝑟. 𝑑𝑒 𝑑𝑒𝑥𝑡𝑟𝑜𝑠𝑎
600𝑚𝑙. 𝑑𝑒 𝑎𝑔𝑢𝑎 𝑑𝑒𝑠𝑡𝑖𝑙𝑎𝑑𝑎 − − − − − − − − − − − − − − − 𝑋
𝑿 = 𝟔 𝒈𝒓 𝒅𝒆 𝒅𝒆𝒙𝒕𝒓𝒐𝒔𝒂
Para agar:
1000𝑚𝑙. 𝑑𝑒 𝑎𝑔𝑢𝑎 𝑑𝑒𝑠𝑡𝑖𝑙𝑎𝑑𝑎 − − − − − − − − − − − 15𝑔𝑟. 𝑑𝑒 𝑎𝑔𝑎𝑟
600𝑚𝑙. 𝑑𝑒 𝑎𝑔𝑢𝑎 𝑑𝑒𝑠𝑡𝑖𝑙𝑎𝑑𝑎 − − − − − − − − − − − − − − − − − 𝑋
𝑿 = 𝟗 𝒈𝒓 𝒅𝒆 𝒂𝒈𝒂𝒓

2) PESAR 2.6GR DE MAÍZ, 1.3GR DE DEXTROSA Y 1.95GR DE AGAR.
FIGURA 1
3) LUEGO EN UN ERLENMEYER ADICIONAR 130ML. DE AGUA
DESTILADA CON LA AYUDA DE LA PROBETA.

4) HOMOGENIZAR AGUA MÁS HARINA DE MAÍZ
5) HERVIR

6) ADICIONAR LA DEXTROSA Y AGAR.
7) HOMOGENIZAR HASTA QUE QUEDE UNIFORME.

8) TRASVASAR
9. ACONDICIONAR CON UNA TORUNDA DE ALGODÓN Y PARAFIL

IV. SABOURAUD
(Cañedo 2004: 21) sostiene que es el medio de
cultivo muy utilizado para aislar hongos de animales.
Sirve para el aislamiento y mantenimiento de hongos en
tubo inclinado. Debido a su composición, los hongos
crecen exageradamente y esporulan bien.
Además, al medio de cultivo, pueden agregarse
otros agentes selectivos de crecimiento.
FORMULACION
CUADRO N° 01: Fórmula gramos por litro
PEPTONA 5,0
TRIPTEINA 5,0
GLUCOSA 40,O
CLORANFENICOL 0,05
AGAR - AGAR 15,0
pH Final : 5,6 ± 0,2
Fuente: Laboratorios Británicos S.A. 2001

USO
 Medio utilizado para el aislamiento, identificación y
conservación de hongos patógenos y saprófitos.
 También es útil para el cultivo de levaduras.
CARACTERISITCAS DEL CULTIVO
 Medio de cultivo deshidratado: color beige claro,
homogéneo, libre deslizamiento.
 Medio de cultivo preparado: color ámbar claro,
ligeramente opalescente sin precipitado.
RESULTADOS
En el siguiente cuadro se muestran las
características que tiene el medio de cultivo para el
crecimiento adecuado de los microorganismos.
Cuadro N° 02: Crecimiento de los Microrganismos.
Microorganismos Crecimiento
Saccharomyces cerevisiae Bueno
Aspergillus niger Bueno
Candida albicans Bueno
Fuente: Laboratorios Británicos s.a. 2001.
NOTA: mantener en lugar fresco, pues la exposición
al calor aumenta la hidrólisis de los componentes.

PROCEDIMIENTO PARA EL PREPARADO ADECUADO DEL
MEDIO.
1. Calculo de proporciones
Para un
litro de agua
47 𝑔𝑟𝑎𝑚𝑜𝑠 𝑝𝑜𝑟 𝑙𝑖𝑡𝑟𝑜.
𝑝𝑟𝑒𝑝𝑎𝑟𝑎 150 𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖𝑜𝑛
47 𝑔 → 1000 𝑚𝑙 𝐻20
𝑋 → 150 𝑚𝑙 𝐻20
𝑋 = 7,05 𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝑠𝑎𝑏𝑜𝑢𝑟𝑎𝑢𝑑
2. Pesar sustancias

3. En un Erlenmeyer adicionar 150 ml de agua destilada.
4. Homogenizar el sabouraud más agua destilada

5. Calentar hasta desaparecer las partículas
6. Trasvasar el contenido a una botella.

CONCLUSIONES:
Al concluir la práctica se concluyó en lo
siguiente:
Se logró conocer los diferentes medios de cultivos
para sembrar microorganismos.
Aprendimos los pasos para elaborar un medio de
cultivo, sus cálculos respectivos de las cantidades
necesarias para su preparación.
Se determinó la importancia que tiene los medios
de cultivo en una investigación en el campo agrícola
como en la medicina, industria alimentaria ya que
gracias a ello se puede hacer el aislamiento de
microorganismos tanto patógenos como benéficos y así
identificarlos para su posterior uso.
Como estudiantes de agronomía gracias a la
práctica en el laboratorio de microbiología
desarrollamos nuestros conocimientos en lo que respecta
a medios de cultivo y así poder aplicar en nuestra vida
profesional.

AISLAMIENTO DIRECTO
Objetivo general
 Purificar hongos y bacterias.
Objetivos específicos
Aprender las técnicas generales para separar a los
Hongos de los demás microorganismos.
Obtener y comprobar la pureza de los cultivos aislados.
Equipos
 Cámara microboy
 Cámara de incubación
 Horno microondas
Materiales
 Muestra: Hoja
 Medio de cultivo PDA
 Mechero alcohol
 Placa Petri
 Vaso de precipitados
 Matraz de Erlenmeyer
 Alcohol de 96°
 Bisturí
 Pinza
 Algodón
 Papel toalla
 Papel aluminio
 Parafilm
 Lapicero de tinta indeleble

EQUIPOS Y MATERIALES UTILIZADOS.
EQUIPOS:
MATERIALES:
CAMARA
MICROBOY
INCUBADOR
A
HORNO
MICROOND
AS
ALCOHOL
96º
PLUMON
INDELEBLE
NEGRO
MECHERO
PLACAS
PETRI
VASO
PRECIPITA
DO
PDA

NOTA: Cuando una enfermedad causada por hongos no
puede ser identificada fácilmente a través de la
consulta bibliográfica, o la producción de signo en
cámara húmeda es necesario proceder al AISLAMIENTO.
BISTURI Y PINZA HOJA DE ROSA PAPEL
TOALLA

PROCEDIMIENTO
1. licuar el medio de cultivo (PDA) en el horno microondas
hasta que se disuelva, posteriormente se hace el proceso
de plaqueado.
2. Luego se procede a desinfectar la cámara microboy (parte
interna y externa), utilizando alcohol, para evitar la
contaminación de los medios de cultivo durante el
aislamiento.
2

3. Lavar el material vegetal (hoja) con agua de caño.
4. En un vaso precipitado con contenido de alcohol
introducimos el material enfermo por 2 segundos.
5. Luego esterilizar el material vegetal enfermo con una
solución de Hipoclorito de sodio por un espacio de dos
minutos.
4

6. Plaquear, se procede la siguiente manera: El matraz de
Erlenmeyer se destapa cerca del mechero, se flamea el
extremo del matraz por la llama y se vierte el medio de
cultivo a un medio estéril, se vuelve a flamear el
extremo del matraz y se lo tapa nuevamente.
7. Realizar pequeños cortes de la zona de avance de la
infección, donde el patógeno está en activo desarrollo.

8. 4 pedacitos de igual tamaño más o menos de 1 cm deben
ser colocados en una placa Petri contenida con PDA en
forma de un cuadrado.
9. Acondicionarlo y utilizando un lapicero de tinta
indeleble se procede a la rotulación.
10. Para concluir la práctica, incubar la placa de
Petri a 25ºC, aproximadamente de 4 a 5 días.

RESULTADOS:
11. A la semana siguiente a partir de los trozos
sembrados se observó la formación de los micelios del
hongo, en función de los tipos de micelio desarrollados
será el número de repiques a realizar para llegar a
obtener un cultivo puro.

AISLAMIENTOS POR ESTRÍAS
Fundamento
(García y paredes 1994:78) sostiene que se
practica para obtener cultivos puros de muestras que
contienen flora polimicrobiana; es también útil para
estudiar la morfología y propiedades hemolíticas de las
colonias asociadas.
 Preparar el medio de cultivo ya sea: OMA; PDA;
BAUVERIA.
 Esterilizar el anza de pt

 Inocular Beauveria al medio de cultivo en forma de
estrías, zig-zag
 Esterilizar otra vez el anza de pt

 Rotular
 Sellar
 Colocar las placas en bolsa de propileno

 Acondicionar en la incubadora.
AISLAMIENTO CON LA ESPÁTULA DE DRIGASKY
Se realiza el mismo procedimiento del aislamiento
por estrías solo que es con la espátula de drigalsky.
 Preparar el medio de cultivo

 Esterilizar la espátula de drigalsky
 Inocular Beauveria al medio de cultivo en forma de
zig-zag
 Esterilizar otra vez la espátula de drigalsky

 Rotular
 Sellar
 Colocar las placas en la bolsa de propileno
 Acondicionar en el autoclave

CONCLUSIONES
Una de las actividades más apasionante del trabajo
con hongos es el aislamiento de hongos. Entre las miles
de especies que existen en la naturaleza el micólogo o
el cultivador necesita aislar una para poder trabajar
con ella.
Para el que se inicia en esta actividad es bueno conocer
las técnicas más usuales que le ayuden rápidamente a
desarrollar su intuición y su habilidad. El aislamiento
de hongos de la naturaleza es uno de los primeros
aprendizajes que debe adquirir quién desee trabajar con
hongos.

AISLAMIENTO POR SERIES DE DILUCION O DILUCIONES
SUCECIVAS
Se aprovecha la propiedad que tienen los medios de
cultivo con agar (medios sólidos), de permanecer
líquidos a temperatura relativamente baja, lo que
permite la incorporación de la mezcla microbiana, o
bien se realizan diluciones en solución fisiológica del
inoculo primario se vuelcan en cajas de Petri estériles,
se les agrega el medio de cultivo fundido a baja
temperatura.
El material incorporado se disemina por toda la
masa del medio de cultivo y una vez solidificado, quedan
los microorganismos inmovilizados y separados uno de
otro, originando colonias que se pueden contar.
Siembra por diluciones seriadas este método
consiste en realizar diluciones sucesivas de la muestra
con el objeto de sembrar después cantidades conocidas
de esas diluciones en capsulas de Petri.
Este método nos permite conocer el número de
microorganismo viable. La viabilidad en microorganismo
se define como la capacidad del microorganismo para
multiplicarse en un medio de cultivo.
Dado es muy pequeña una probabilidad de orden 0.05
cuando se siembra un gran número de tubos con un inoculo
de esta dimensión puede calcularse mediante la teoría
de probabilidades que la fracción que el tubo recibe el
organismo es 0.048: la fracción que recibe tres
organismos es 0.00002. Como resultado de ello si un
tubo muestra algo de crecimiento, existe una elevada
probabilidad de que este en crecimiento sea el resultado
de la introducción de un solo organismo disminuye

rápidamente a medida que aumente el número medio de
organismo en el inocuo
Por lo tanto es esencial aislar a partir de una
serie de tubos cuya gran mayoría no muestre ningún
crecimiento.
Objetivo.
 Que el estudiante conozca el aislamiento por dilución
y otra forma para aislar microorganismos de tejido
vegetal enfermo, particularmente bacteria.
 El método de dilución para el caso de bacterias ofrece
mayor sencillez y menor cantidad de contaminantes y es
uno de las maneras más comunes en el aislamiento de
este tipo de microorganismos
 Es inocular una serie de tubos con una suspensión
microbiana tan diluida que la probabilidad de
introducir siquiera un solo individuo dentro de un tubo
Materiales:
 Matraz.
 Erlenmeyer.
 Tubos de ensayo.
 Mechero de bunsen
 Placa Petri.
 Hipoclorito de sodio 1%Agua destilada
 Esterilizada.
 Pipeta.
 Tubo de ensaye.
 plástico adherente.
 Material vegetal enfermo
 Cámara de aislamiento.
 Gradilla.

 Cinta.
 Tubos con caldo y agar Nutritivo
PROCEDIMIENTO
Limpieza (desinfección, del material)
Factores de inoculación.
 Temperatura.
 Densidad de siembra.
 Luz.
 Nutrición.
 Uniformización de inocuo(cantidad calidad)
Por diluciones sucesivas consiste en hacer
diluciones seriadas de la muestra o del inóculo, ésta
se utiliza cuando se tienen muestras líquidas agua, se
realiza haciendo diluciones a las muestras: 1:100, 1:1

000, 1:10 000 etc. Luego se siembra cada dilución en
placas de Petri con medios de cultivo.
Una vez obtenidos los cultivos, se puede proceder
al examen macroscópico: morfología de las colonias,
actividades bioquímicas o características.
METODOLOGÍA:
Manejo del asa bacteriológica o de siembra:
30 Tomado de Microbiología Tomo II de Granados 2ª
edición
Técnica de siembra por diluciones sucesivas

BIBLIOGRAFÍA
Eduardo R, French y Teddy t Heber. 1980 Métodos De
Investigación Fitopatológica. COSTA RICA.
Pedro García Y Fernando Paredes 1994.Microbiologia
Clínica (Practica) 2º Edición. UNIVERSIDAD DE CADIZ.
Practica De Patología Vegetal 1990. Universidad De
Murcia.
Verónica Cañedo Teresa Ames Cip 2004. Manual De
Laboratorio Para Manejo De Hongos Entomopatógenos. Lima
Perú.

Medios de cultivo para el crecimiento de microorganismos

Recommandé

Recommandé

Contenu connexe

Tendances

Tendances (20)

En vedette

En vedette (19)

Similaire à Medios de cultivo para el crecimiento de microorganismos

Similaire à Medios de cultivo para el crecimiento de microorganismos (20)

Dernier

Dernier (20)

Medios de cultivo para el crecimiento de microorganismos