2. Plan :
• 1- les anticorps monoclonaux : vue générale
• 2-la technique d’hybridation cellulaire
A- Matériel biologique utilisé dans la technique d’hybridation
cellulaire
B-Etapes pré-hybridation cellulaire
C- la technique d’hybridation cellulaire,proproment dit.
D- étapes post-hybridation
3. • Les Anticorps monoclonaux sont une population
homogène d’anticorps issus d’un «seul et
unique» clone de cellules B.
• Ils sont :
Spécifiques
on peut diriger
l’anticorps vers un
épitope donné de la
protéine
Affines
on peut créer des
anticorps
extrêmement
affines
Production
massive et
constante
de ces anticorps
4. Des cellules B
extraites des
organes
lymphatiques
secondaires
Des cellules
Myélomateu
ses
(immortelle
s)
polyéthylène
glycol (PEG)
Facteurs
de
croissance
SVF Milieu
HAT
Et autres
A- Matériel utilisé dans la technique d’hybridation cellulaire:
5. • Immunisation :
Les antigènes que l’on injecte à la souris pour créer
l’anticorps peuvent être des haptènes ou des protéines
porteuses.
Cette injection a pour effet de produire des plasmocytes
libérant des anticorps polyclonaux contre cet antigène
• Extraction des cellules B de la sourie
6. • Des partenaires de fusion:
Cellules B extraites d’organes lymphoïdes secondaires
(rate, ganglions)+ cellules myélomateuses ayant perdus
l’HGPRT ; Cette enzyme impliquée dans la synthèse des
nucléotides dans la voie de sauvetage
• Une méthode de fusion:
Nous allons utiliser soit la fusion chimique grâce à PEG
ou la Fusion physique qui se fait par électro fusion
7. • Sélection du milieu :
Nous devons sélectionner un milieu où l’on doit
retrouver du HAT (Hypoxanthine Aminopterine
Thymidine), des facteurs de croissance (IL6 b
mercaptoethanol), du sérum de veau fœtal, des
fibroblastes, sous atmosphère CO2 .
Dans ces conditions, seuls les hybridomes se
développent à hauteur de 1 x 105 cellules/ml
8. • Le clonage :
• Il peut se faire par 2 méthodes:
Soit dans l’Agarose où l’on visualise directement les
colonies cellulaires dans l’agar, que l’on remet en culture
après dilution
Soit par dilution limite où le clonage est réalisé
directement dans une plaque de microtitration.
9. • Production :
Production en grande quantité : production en batch ou
microencapsulation
• Production en micro particules: technique de capture des
hydridomes dans des billes d’alginate sans
contamination et avec une purification simplifiée
D- étapes post-hybridation
