2. Protein Metabolizması
• Proteinler birçok informasyon yolunun son ürünüdür.
Tipik bir hücrede binlerce farklı protein vardır. Bu
proteinler hücrenin ihtiyaçlarına göre sentezlenir ve
uygun hücresel hedeflere yönlendirilirler.
• Protein biyosentezi en kompleks biyosentetik işlemdir.
Ökaryotik protein sentezine 70’in üzerinde ribozomal
protein, 20 veya daha fazla aktive olmuş amino asit
öncülü, bir düzineden daha fazla yardımcı enzim ve
faktör başlama, uzama ve polipeptid sonlanması için
gereklidir.
3. Protein Metabolizması
• Ayrıca, farklı proteinlerin final işlenmesi için ek olarak
100 kadar enzim gereklidir.
• Sonuç olarak, 300’den fazla sayıda farklı makromolekül
protein sentezinde görev alır.
• Protein biyosentezi hücredeki tüm biyosentetik
reaksiyonlarda kullanılan enerjinin % 90’ını kullanır.
• Tipik bir bakteri hücresinde 20.000 ribozom, 100.000
ilişkili protein faktörü ve enzim, 200.000 tRNA
hücrenin kuru ağırlığının % 35’inden fazlasını oluşturur.
• Olayın karmaşıklığına rağmen proteinler oldukça hızlı
sentez edilirler. Bir E. coli hücresinde 100 amino asitlik
bir polipeptit yaklaşık 5 saniyede sentez edilir.
5. Genetik Kod
• Amino asidler, amino açil-tRNA
sentetaz enzimi ile aminoaçil-
tRNA’ları oluştururlar.
• Crick’in adaptör molekülü hipotezinde
adaptör molekül bir uçta amino
asidleri bağlarken diğer uçta amino
asit ile ilişkili mRNA dizisi ile bağlantı
kurar.
• Bilgi böylece 4 bazlı nükleik asit
dizilerinden 20 amino asitli
proteinlere çevrilir (Translasyon).
6. Crick’in adaptör
hipotezi
Amino asidler kovalent olarak
tRNA’nın 3′ ucuna bağlanır.
tRNA’daki üçlü kodon, mRNA’daki
bazlar ile komplementer olarak
hidrojen bağı ile bağlanır.
7. Genetik kod sentetik mRNA’lar kullanılarak
çözülmüştür
• Dört nükleotidin ikili olarak değişik şekillerde bir araya
gelme olasılığı 42=16
• Dört nükleotidin üçlü olarak değişik şekillerde bir araya
gelme olasılığı 43=64
• Kodon: Spesifik bir amino asidi kodlayan üç nükleotid’ten
oluşan dize
• Başlama (initiasyon) kodonu (AUG), tüm hücrelerde bir
polipeptidi başlatan sinyal kodonu (Bir polipeptidin içinde
sinyal ayrıca Met’i kodlar)
• Sonlanma-DUR (terminasyon) kodonları (UAA, UAG ve
UGA), hiçbir amino asidi kodlamazlar. Bu kodonlar
polipeptid sentezinin bittiğinin sinyalini verirler (Stop
veya nonsense kodonlar)
• Dejenerasyon: Bir amino asidin birden fazla kodon ile
kodlanmasıdır.
11. Kodon ve antikodon
eşleşmesi
tRNA’da bulunan inosinat (I), U, C ve A ile hidrojen bağı yapabilir
12. Wobble bazı
• Wobble bazı tRNA’ların birden fazla
kodonu tanımalarını sağlar
• Antikodon: tRNA’da mRNA’ya karşılık
gelen kodon.
• Antikodon’daki ilk baz (5′ 3′
yönünde) wobble bazdır.
13. Wobble Hipotezi
• Bir mRNA kodonundaki ilk iki baz,
tRNA’daki antikodon ile her zaman güçlü
Watson-Crick baz eşleşmesi yapar.
• Antikodondaki ilk baz (5′ 3′ yönünde
okunur) kodondaki 3. bazın karşısındaki
bazdır. tRNA tarafından tanınan
kodonların sayısını belirler (Bkz. Tablo)
• Tüm 61 kodonun translasyonu için
minumum 32 tRNA gereklidir.
20. tRNA’nın karakteristik
yapısal özellikleri bulunur
• Birçok tRNA’nın 5′ ucunda guanilat (PG)
rezidüsü ve 3′ ucunda, CCA (3′) sekansı vardır.
• Aminoasit kolu spesifik bir amino asidi taşır.
• Antikodon kolu, antikodon içerir.
• TψC kolu, ribotimidin (T), pseudouridin (ψ)
içerir.
• D ve TψC kolları tRNA’nın katlanması için
önemlidir.
30. Her bir amino asit için özgül amnioaçil-
tRNA sentetaz enzimi vardır
• Her bir tRNA’ya doğru aminoasitin tanınıp,
bağlanması gerekir. Ayrıca, bu süreç enerji
gereksinen bir sentez sürecidir. Bu nedenle, her
hücrede her bir aminoasite özgü aminoaçil tRNA
sentetaz enzimleri bulunur.
• Enzim katalizli tepkimede ATP hidrolizi ile
aktive edilen amino asit, tRNA’nın 3’ ucundaki
adenin bazına ait riboz şekerin 3’-OH grubuna
bağlanır.
32. Protein Sentezinde Amino asitlerin aktivasyonu
İki tip amino açil tRNA sentetaz
enzimi bulunur.
Her amino asidin karbonil grubu
peptid bağı oluşumunu kolaylaştırmak
için aktive edilir.
Her amino asit ile şifrelenen bilgi
eşleştirilir.
Bu enzimin hata düzeltme görevi de vardır.
33. tRNA doğru aminoasiti tanımalıdır
•aminoacyl tRNA
synthetases
tarafından
katalizlenir
•amino asitler aktive
edilir
(aminoacyladenylic
acid)
•ATP gerekir
Mg 2+
Amino acid + tRNA + ATP aminoacyl-
tRNA + AMP + PPi
Fig. 14.5
40. Sentezin başlaması
Bakteriyel ribozomda amino açil
tRNA’ların bağlandığı üç bölge vardır:
Amino açil veya A bölgesi,
P bölgesi,
E (çıkış) bölgesi
1. İlk olarak mRNA başlama
faktörleri ile birlikte (IF1, 2, 3) küçük
alt birime bağlanır.
2. Başlatıcı fMet-tRNA P
bölgesindeki mRNA kodonuna
bağlanır; IF3 ayrılır.
3. Büyük alt birim komplekse
bağlanır; IF1 ve IF2 ayrılır; EF-Tu,
tRNA’ya bağlanarak, A bölgesine
girişi kolaylaştırır.
41. Zincir uzaması: İlk basamak
(ikinci amino açil tRNA’nın
bağlanması”)
• İkinci yüklü tRNA, EF-Tu’nun
yardımı ile A bölgesine girer;
uzamanın ilk basamağı başlar.
42. Uzama, İkinci basamak: Peptid bağı
oluşumu
A bölgesinde Dipeptit bağı oluşur
(Peptidil transferaz aktivitesi);
Yüksüz tRNA, E bölgesine hareket
eder ve ribozomu terk eder.
Yeni oluşan dipeptit P bölgesine
hareket eder.
mRNA 3 baz kayar; EF-G
translokasyon basamağını
kolaylaştırır, uzamanın ilk basamağı
tamamlanır.
43. Uzama, üçüncü
basamak:
translokasyon
EF-Tu +GTP + tRNA A bölgesine
yerleşir, EF-Tu girişi kolaylaştırır;
Peptid bağı oluşumu ile tripeptid
elde edilir.
yüksüz tRNA, E bölgesine hareket
eder.
mRNA 3 baz kayar; EF-G
translokasyon basamağını
kolaylaştırır, uzamanın ilk basamağı
tamamlanır.
44. Bakterilerde protein
sentezinin terminasyonu
Basamak 1- DUR kodonlarına gelindiğinde, GTP
bağımlı salınma faktörlerine “harekete geçme”
sinyali verilirve polipeptit zinciri ile tRNA
arasındaki bağı kırarak zincirin translasyon
kompleksinden ayrılmasını sağlar.
Basamak 2- Bu kırılmadan sonra tRNA
ribozomdan salınır ve ribozom alt birimlerine
ayrılır.
45. Polizom
Hem ökaryotik, hem de prokaryotik
hücrelerde protein sentezinde 10 ile
100 ribozom aynı anda aktiftir.
Bunlara polizom denir.
49. Ökaryotlarda Protein Sentezi
• Daha komplekstir
• mRNA stoplazmaya taşınır
• mRNA 1-2 saatte yıkılır
• Kozak sequence 5’-ACCAUGG…..
• AUG Met kodlar
• Daha fazla sayıda ribozom görev alır
• Ribozomlar E.R’a tutunur.
52. Amino asitler N terminalden C-terminale doğru
peptid bağı ile birleştirilirler
53. Sekonder yapıda, polipeptit zincirinde birbirine komşu olan
amino asitlerin oluşturduğu, düzenli ve tekrarlayan bir
konfigürasyon bulunur.
54. Proteinin tersiyer yapısı zincirin uzaydaki
3 boyutlu konformasyonunu ifade eder.
Bu yapı uzayda …..
•Sisteinler arasındaki disülfid bağları
•Hidrofilik polar R grupları
•Hidrofobik nonpolar R grupları ile stabilize edilir
57. Translasyon Sonrası
Modifikasyonlar
• N-ucu ve C-ucundaki a.a ler çoğunlukla uzaklaştırılır yada
değişime uğrar.
• Bazen tek bir a.a değişime uğrayabilir.
• Bazen karbohidrat yan zincirleri takılabilir
• Polipeptit zincirlerinde kırpılma yapılabilir.
• Sinyal dizileri proteinden uzaklaştırılır.
• Polipeptit zincirleri çoğu kez metallerle kompleks yapar
• Folding: chaperonins
58. Post-translasyonel modifikasyonlar
• Amino terminal ve karboksi terminal
uçta modifikasyonlar: Tüm
polipeptidler bakterilerde N-
formilmetionin, ökaryotlarda ise
metionin ile başlar. Formil grubu, bu
amino asidler final peptid’den
uzaklaştırılır.
• Ökaryotik proteinlerin % 50’sinde
amino terminal uçtaki amino grubu N-
asetil’lenir.
59. Post-translasyonel
modifikasyonlar
• Bazı amino asitlerin modifikasyonu: Ser, Thr ve
Tyr rezidülerinin hidroksil gruplarının enzimatik
olarak ATPile fosforillenmesi. Böylece diğer
moleküllerle iyonik bağ yapabilen eksi yüklü a.a ler
oluşur.
• Bazı proteinlerde Glu rezidüsüne ekstra karbonil
grubu eklenmesi (Örn.protrombin’de K vitamininin
rolü)
• Bazı kas proteinlerinde ve sitokrom c’de
monometil ve dimetillizin rezidüleri (Örn.
calmodulin’de trimetil lizin rezidüsü bulunmakta)
63. Post-translasyonel
modifikasyonlar
• Karbohidrat yan zincirinin eklenmesi: Polipeptid
zincirinin sentezi sırasında veya sonra
glikoproteinin karbohidrat yan zinciri eklenir. Bazı
glikoproteinlerde karbohidrat yan zinciri
enzimatik olarak Asn rezidülerine bağlanır (N-
linked oligosakkaridler), diğerlerinde Ser ve Thr
residülerine bağlanır (O-linked oligosakkaridler).
• Birçok protein ekstrasellüler olarak fonksiyon
görür.
64. Post-translasyonel
modifikasyonlar
• Sinyal sekansının kaybı: Amino
terminal uçtaki 15-30 rezidülük kısım
proteinin hücre içi hedeflere
yönlendirilmesinde önemli rol oynar.
Daha sonra bu kısım çıkartılır.
65. Post-translasyonel
modifikasyonlar
• Polipeptitlerin metallerle kompleks
oluşturması : Proteinlerin tersiyer ve
kuaterner yapılarında metal atomları vardır
ve bu yapıları kazanmaları çoğu bu kez
metallere bağlıdır.
66. Post-translasyonel
modifikasyonlar
• Prostetik grupların eklenmesi: Birçok protein
aktiviteleri için kovalant bağlı prostetik gruplara
gereksinim duyarlar. Örn. Asetil-CoA
karboksilaz’ın biyotin molekülü ve sitokrom c’nin
hem grubu
• Proteolitik işlemler: Birçok protein sentez sonrası
kısaltılır. Örn. İnsulin
• Disülfid çapraz bağlarının oluşumu: İki sistein
rezidüsü arasında çapraz bağ oluşur. Bu proteini
hücre içinde ve dışında etkilerden korur.
71. Siklohekzimid
Sikloheksimid, 80 S ökaryotik
ribozomlarda peptidil transferaz
aktivitesini bloke eder fakat 70 S
Bakteriyel (ayrıca mitokondrial ve kloroplast)
üzerine etkis yoktur.
74. Toksinlerle protein sentez
inhibisyonu
• Difteri toksininin, ökaryotik elongasyon
faktörü üzerine etkisi vardır.
• Risin, ökaryotik ribozomlarda 60 S alt
üniteyi inaktive eder (23S rRNA’da
spesifik bir adenozin’in depurinasyonu ile).