Les dosages des facteurs II, V, VII et X peuvent être effectués par un test en un temps basé sur le temps de prothrombine...

1. A/S
La rétraction du caillot
Dosages basés sur le
temps de
prothrombine (facteurs II,
V, VII ou X)
Par : S/Abdessemed

2. A/S
A/S
1. Principe :
Les dosages des facteurs II, V, VII et X
peuvent être effectués par un test en un
temps basé sur le temps de prothrombine.
Le dosage consiste essentiellement en une
comparaison entre la capacité des dilutions
d’un plasma étalon ou de référence et celle
du plasma à tester à corriger le temps de
prothrombine d’un plasma totalement
déficient dans le facteur que l’on veut
mesurer.

3. A/S
A/S
Dans un dosage du facteur V, par
exemple (description ci-dessous), le
plasma-réactif est déficient en facteur
V mais contient des quantités normales
des facteurs II, VII, X et de
fibrinogène.

4. A/S
A/S
Les facteurs de coagulation II, VII et
X peuvent être dosés de la même façon
que dans l’exemple décrit ci-dessous
mais en utilisant le plasma déficient
approprié.
Il faut utiliser un plasma de référence
approprié dont la concentration en
facteur que l’on doit doser est connue.

5. A/S
A/S
RÉACTIFS
Plasma déficient en facteur V
La déficience en facteur V peut être d’origine
congénitale ou artificielle (plasma vieilli).
Solution saline en tampon d’Owren
Plasma citraté pauvre en plaquettes : plasma à
tester et plasma étalon Pour le plasma étalon,
utiliser un pool de plasma normal de 20
donneurs (conservé à -70 °C ou à une
température inférieure) ou un plasma de
référence ou un étalon commercial.
 Thromboplastine/calcium (comme utilisé dans
les test de TP)

6. A/S
A/S
MÉTHODE
1. Préparer des dilutions dans des tubes
en plastique pour le plasma à tester et
le plasma étalon
Dilution Plasma (ml) Solution saline tampon d’Owren (ml)
1/5 0,1 0,4
1/10 0,1 0,9
1/20 0,5 (1/10) 0,5
1/40 0,5 (1/20) 0,5

7. A/S
A/S
2 Doser chaque dilution de plasma de
référence ou étalon comme suit :
Pipeter 0,1 ml de chaque dilution dans un
tube en verre de 75 X 10 mm.
Ajouter 0,1 ml de plasma déficient en
facteur V.
Chauffer à 37 °C pendant 2 minutes.
Ajouter 0,2 ml de thromboplastine/calcium
préchauffée.
Enclencher le chronomètre et mélanger.

8. A/S
A/S
3 Noter le temps de coagulation.
4 Répéter avec les dilutions de plasma à
tester.
Pour les plasmas à tester, doser des
dilutions de 1/10, 1/20 et 1/40 si l’on
prévoit qu’ils seront normaux. Pour les
plasmas à tester que l’on prévoit avoir
des taux réduits, tester des dilutions de
1/5, 1/10 et 1/20.

9. A/S
A/S
Un échantillon « tampon » doit aussi être
dosé comme suit :
- 0,1 ml solution tampon d’Owren
- 0,1 ml plasma déficient en facteur V
- 0,2 ml réactif à la thromboplastine/calcium
Le temps de coagulation de l’échantillon «
tampon » reflète la qualité du plasma
déficient dont le taux doit être inférieur à
moins de 1 %.

10. A/S
A/S
RÉSULTATS
Tracer la courbe des temps de
coagulation des plasmas contrôle et des
plasmas à tester en fonction des
concentrations du facteur V sur du
papier logarithmique.
Une valeur de 100 % est arbitrairement
assignée à la dilution de 1/10, donc une
dilution de 1/5 équivaut à 200 %, etc.

11. A/S
A/S
Le taux en facteur V dans le plasma du
patient, par rapport au plasma normal ou
au plasma de référence étalon, est
extrapolé à partir des graphiques.
NB : Les personnes ayant des taux
abaissés en facteur V devraient être
soumises à un dosage du facteur VIII
afin d’exclure une déficience combinée
en facteurs V et VIII.

12. A/S