Introduction, réaction de Waaler-Rose, réaction au Latex : principe-réactifs-mode opératoire-lecture-interprétation.

1. Sérodiagnostic
de la polyarthrite
rhumatoïde
Par S / Abdessemed
Abdsalah

2. Abdsalah
Introduction
• La polyarthrite rhumatoïde est une
maladie inflammatoire du tissu
conjonctif atteignant surtout le
synoviale des articulations, Son
retentissement fonctionnel est grave
puisqu’elle provoque souvent des
déformations et des destructions
articulaires irréversibles.

3. • C’est une des
affections
rhumatismales
des plus
répandues,
avec une nette
prédominance
féminine.
Abdsalah

4. • La découverte du Facteur Rhumatoide
remonte à 1940. Elle est due à WAALER
et sera complétée par ROSE en 1948.
• Ces auteurs ont démontré que les
sérums de sujets atteints de
polyarthrite rhumatoïde agglutinent les
hématies de mouton sensibilisées par un
sérum de lapin anti hématies de mouton.
Abdsalah

5. • Les techniques classiques reposent
toutes sur des réactions d’agglutinations
passives entre des Facteurs Rhumatoides
de classe igM et des igG fixées sur un
support (hématies ou particules de
latex).
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6. Abdsalah
Réaction de Waaler-Rose
modifiée

7. Abdsalah
Principe
• Des hématies de mouton sont
sensibilisées avec du sérum de lapin
anti-hématies de mouton (igG).
• La réaction est basée sur les propriétés
hémagglutinantes spécifiques du FR,
utilisées dans les réactions type
WAALER-ROSE.

8. Abdsalah
Principe
Hématies
sensibilisées
FR de
classe igM Agglutination

9. Abdsalah
Matériel et réactifs
- Hématies test
- Hématie contrôle
- Compte gouttes délivrant 50μl/gouttes
- Agitateur à usage unique
- Lame de verre quadrillé

10. Abdsalah
Mode opératoire
Sur une lame de verre :
-déposer sur la lame dans chaque case T
et R 50 μl de sérum à examiner
-Agiter soigneusement les suspensions
d’hématies témoin et révélateur.

11. - Ajouter dans la case T une goutte de
réactif témoin « A » et dans la case R une
goutte de réactif révélateur « B ».
-Mélanger les deux gouttes en utilisant un
agitateur à usage unique.
NB :
Abdsalah
Lire les résultats pendant les deux
premiers minutes de la manipulation.

12. Abdsalah
Lecture
 Réaction positive :
• case T : absence d’agglutination
• Case R : agglutination visible à l’oeil nu.
 Réaction négative :
• case T : Absence d’agglutination
• Case R : Absence d’agglutination

13. Réaction d’agglutination au
Abdsalah
LATEX

14. Abdsalah
Principe
• Le test FR –Latex est un test
d’agglutination rapide pour la détection
directe et semi quantitative sur carte
des facteurs rhumatoides (FR).
• L’antigène, est une suspension de
particules de latex recouvertes de
gamma globulines humaines, qui
s’agglutinent en présence des facteurs
rhumatoides présents dans le sérum des
patients.

15. Abdsalah
Réactifs
Antigène FR- Latex: 2,5 ml, Suspension de
particules de latex recouvertes de gamma
globulines humaines, azide de sodium 0,95
g/l la sensibilité de l’antigène est calibrée
de manière à détecter environ 08UI/Ml
d’une préparation internationale de
référence de sérum de polyarthrite
rhumatoïde (WHO).
Contrôle positif: 1ml sérum humain, azide
de sodium 0,95 g/l.
Contrôle négatif: 1 ml sérum animal, azide
de sodium 0,95 g/l.

16. Matériel
 Agitateur rotatif
réglable à 100 r.p.m
 Cartes tests
 Agitateurs à usage
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unique

17. Abdsalah
Echantillons
Sérum : stable pendant 48h à 2-8°C.
• Les sérums hémolysés et lipémiques ne
sont pas adéquats pour le test ; ils
risquent de donner des résultats
erronés.

18. Abdsalah
Protocole
• Préalablement, sortir les réactifs et les
laisser s’équilibrer à la température de la
pièce.
• Déposer 50μl d’échantillon et une goutte
de chaque contrôle dans les cercles
individualisés sur la carte test.
• Agiter légèrement le flacon d’antigène
avant de l’utiliser. Déposer une goutte de
réactif FR- Latex dans chaque cercle
près de l’échantillon à tester.

19. • Mélanger avec agitateur à usage unique
de manière à recouvrir totalement l’ère
définie par le cercle. Utiliser un nouvel
agitateur pour chaque échantillon.
• Faire tourner la carte à 100 r.p.m.
pendant 2 minutes
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20. Lecture et Interprétation
• Apres avoir retiré la carte de l’agitateur
rotatif, examiner à l’oeil nu la présence
ou l’absence d’agglutination dans la
minute qui suit .
• Une agglutination visible indique la
présence de facteur rhumatoïde
≥08UI/ml.
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21. • Un sérum positif doit être titré. Pour
titrer, faire des dilutions de deux en
deux dans une solution saline à 9 g /l.
• le titre d’un sérum est défini comme
étant la plus grande dilution donnant un
résultat positif.
• Le taux approximatif d’un sérum en FR
(UI /mL) peut être obtenu en multipliant
le titre par la limite de sensibilité (08
UI/mL).
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22. Abdsalah
Limites de la Méthode
• Un diagnostic ne peut reposer
uniquement sur ce test qui doit venir en
complément d’autres tests biologiques
(ex : Waaler-Rose) et de l’examen
clinique.
• L’incidence de résultats positifs avec
des sérums de sujet apparemment sains
est de l’ordre de 3-5%.

23. • Des réactions positives peuvent être
obtenues non seulement dans le cas de
polyarthrite rhumatoïde, mais aussi de
mononucléose infectieuse, d’hépatite, de
syphilis, et de patients âgés.
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24. Abdsalah
Notes
• la sensibilité du test diminue à basse
température. Les meilleurs résultats son
obtenus à des températures supérieures
à 10°C.
• une lecture différée peut résulter en
une surestimation du titre de FR.

25. Abdsalah