diagnostic sérologique de Salmonella typhi, de salmonella para typhi A,B et C et éventuellement de salmonella typhi –murium et Salmonella enteritidis...

1. Sérodiagnostic de
Abdsalah
Widal-Félix
(Méthode par centrifugation)
Par : S / Abdessemed

2. Abdsalah
Principe :
• Des dilutions croissantes de sérum sont
mises en présence des suspensions « O »
(alcoolisées) et « H » (formolées) de
Salmonella typhi, de salmonella para
typhi A,B et C et éventuellement de
salmonella typhi –murium et Salmonella
enteritidis ou de suspension « Vi ».

3. • Ceci permet la mise en évidence dans le
sérum du sujet d’agglutinines O
correspondant à l’antigène somatique et
d’agglutinines H correspondant à
l’antigène flagellaire.
Abdsalah

4. Abdsalah
Réactifs :
Soluté physiologique à 8. gr/l ClNa
Suspension antigéniques «O »et « H »
- de Salmonella typhi
-de Salmonella paratyphi A
-de Salmonella paratyphi B
-de Salmonella paratyphi C

5. Abdsalah
Suspension « H »
-de Salmonella enteritidis
-de Salmonella typhi-murium
Suspension Vi de salmonella typhi

6. Abdsalah
Mode opératoire :
Méthode qualitative :
• Technique par centrifugation :
• Préparer des dilutions au 1/10 et au 1/20
des sérums à examiner, en solution de ClNa
à 8.5 g/l :
-dilution au 1/10 : 0.2 ml de sérum + 1.8 ml
de ClNa
-Dilution au 1/20 : 0.1 ml de sérum+1.9 ml
de ClNa
• Préparer la galerie suivante :

7. Abdsalah
N° des
tubes
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
sérum
au 1/20
(ml)
- 0.1 - 0.1 - 0.1 - 0.1 - 0.1 - 0.1
sérum
au 1/10
(ml)
0.1 - 0.1 - 0.1 - 0.1 - 0.1 - 0.1 -
Ajouter
les
suspensi
ons
antigéni
ques
TO
0,9
TO
0,9
TH
0,9
TH
0,9
AO
0,9
AO
0,9
AH
0,9
AH
0,9
BO
0,9
BO
0,9
BH
0,9
BH
0,9
Dilution
……
1/100 1/200 1/100 1/200 1/100 1/200 1/100 1/200 1/100 1/200 1/100 1/200
 Centrifuger 5 mn à environ 3000 tours/mn.
 Lecture après remise en suspension par une chiquenaude

8. • Méthode quantitative :
• Préparer les dilutions suivantes de sérum :
Abdsalah
NaCl (ml)
Sérum(ml)
1.8
0.2
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
Dilutions
obtenues…….
1/10 1/20 1/40 1/80 1/160

9. • Pour chaque suspension réaliser la galerie suivante, à
Abdsalah
l’aide des dilutions de sérum :
Dilution du
sérum…
1/10 1/20 1/40 1/80 1/160 Témoin
antigène
sérum dilué (ml)
NaCl ( ml )
suspension
antigénique....
0.1
-
0.9
0.1
-
0.9
0.1
-
0.9
0.1
-
0.9
0.1
-
0.9
-
0.1
0.9
Dilution finale.. 1/100 1/200 1/400 1/800 1/1600
 Centrifuger 5 mn à environ 3000 tours/mn.
 Lecture après remise en suspension par une chiquenaude

10. Abdsalah
Lecture :
• Les témoins antigène sont troubles de
façon homogène.
• Si le sérum contient des agglutinines » H
« correspondant à l’une des suspensions on
observe une agglutination floconneuse
facilement dissociable.
• Si le sérum contient des agglutinines » O »
correspondant à l’une des suspensions, on
observe une agglutination fine, granulaire,
difficilement dissociable.

11. Abdsalah
Interprétation :
• Dans les fièvres typho-paratyphoidiques,
les agglutinines « O » apparaissent vers le
8e jour de la maladie, les agglutinines » H »
vers le 10-12 jour.
• A la période d’état, il y aura donc
simultanément des agglutinines anti O et
anti H, ces dernières atteignant un titre
plus élevé.

12. Abdsalah

13. • Il faut prélever au moins deux
échantillons de sérum, espacés de 7 à 10
jours. Une élévation du taux des
agglutinines est le signe d’une infection
en cours.
• L’interprétation des résultats sur un seul
prélèvement est difficile et nécessite la
connaissance des antécédents de
vaccination du malade et de l’évolution de
la maladie.
Abdsalah

14. • Les titres élevés contre les antigènes »
O » sont considérés de plus grande
signification que les titres contre les
antigènes « H », car les anticorps anti O
disparaissent plus vite après
immunisation.
• Cependant, un traitement précoce du
malade par du chloramphénicol et les
corticoïdes peut empêcher l’apparition
dans son sérum des agglutinines » O ».
Abdsalah

15. • L’interprétation des résultats nécessite
aussi la connaissance des parentés
antigénique existant entre les
différentes espèces de Salmonelles.
• Par exemple Salmonella enteritidis a des
antigènes « O » en commun avec
Salmonella typhi ;
• Salmonella typhi-murium à des antigènes
« O » en commun avec Salmonella para B.
Abdsalah

16. • Pour confirmer ou éliminer l’hypothèse
d’une infection due à ces germes,
• il faudra rechercher les agglutinines
«H » anti Salmonella enteritidis ou
Salmonella typhi-murium.
Abdsalah

17. • Les agglutinines « Vi » sont présentes
dans le sérum de 80 à 90 % des
porteurs de Salmonella typhi, et chez 5
à 10 % des individus normaux. L’intérêt
de leur recherche est donc limité aux
enquêtes épidémiologiques.
Abdsalah

18. Abdsalah